五倍子醇提取物和槲皮苷在制备抗鱼类虹彩病毒药物中的应用

本发明涉及水产动物疾病防治领域，尤其是涉及五倍子醇提取物和槲皮苷在制备抗鱼类虹彩病毒药物中的应用。

背景技术：

1、石斑鱼是我国名贵的养殖水产品之一，有着极高的经济价值和食用价值，同时消费者对石斑鱼的需求量也逐年增加，有着广阔的市场前景。由于繁殖生长的调控和人工养殖技术的不断改进，我国的石斑鱼养殖逐渐转变为大规模的水产养殖业，极大地提升了石斑鱼的产量。

2、随着石斑鱼养殖产业的快速发展，养殖规模的不断扩大，水体养殖环境受到严重污染，病害问题随之增加。其中，石斑鱼虹彩病毒(singapore grouper iridovirus，sgiv)是严重威胁石斑鱼养殖业可持续发展的传染性病毒病原之一，有着传播速度快、致病性高、致死率高等特点，近年来，石斑鱼虹彩病毒已对石斑鱼养殖业造成重大经济损失。针对石斑鱼虹彩病毒的防治可通过疫苗注射达到预防的作用，但在疫苗使用的过程中存在一定的风险，并且，抗生素和化学药物治疗也会使鱼类产生耐药性并伴有毒副作用，同时也会恶化养殖生态环境、出现药物残留等问题，不利于水产行业的健康发展。

3、因此，迫切需要研发出安全且高效的渔用药物以防控、治疗石斑鱼养殖过程中石斑鱼虹彩病毒的爆发，实现水产养殖的健康发展。

技术实现思路

1、为了提高对鱼类虹彩病毒的预防和治疗效果，并且降低鱼类的耐药性和因预防治疗而对鱼体产生的毒副效果，本技术提供五倍子醇提取物和槲皮苷在制备抗鱼类虹彩病毒药物中的应用。

2、第一方面，本技术提供一种五倍子醇提取物和槲皮苷在制备抗鱼类虹彩病毒药物中的应用，采用如下的技术方案：

3、五倍子醇提取物和槲皮苷在制备抗鱼类虹彩病毒药物中的应用。

4、五倍子是同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生于漆树科植物“盐肤木”及其同属其他植物的嫩叶或叶柄刺伤而生成一种囊状聚生物虫瘿，经烘倍干燥后所得。现有研究中五倍子醇提取物有敛肺降火、涩肠止泻、敛汗、止血、收湿敛疮的功效，从而具有抗龋齿、抗菌、止泻、止血、抗炎、促进伤口愈合、抗癌、清除自由基、抗氧化等多种药理作用。

5、槲皮苷是一种广泛存在于植物中的黄酮类单体化合物，具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂等多种药理作用；槲皮苷表能降低高脂血症大鼠的tc、tg、ldl-c水平，明显提升hdl-c水平，具有调血脂作用。槲皮苷能够通过由芬顿反应和nmda受体的负性调节介导实现抗氧化的作用。

6、但目前无论是单独的五倍子醇提取物、槲皮苷，亦或是五倍子醇提取物与槲皮苷的配合在抗鱼类虹彩病毒中的应用均鲜有报道。这是由于，基于目前关于五倍子醇提取物公开的药用原理和槲皮苷公开的药用原理将两者局限在各自的应用领域中，使两者目前的现有研究局限在各自的应用领域中；基于两者的药用机理，更没有将两者结合应用在抗鱼类虹彩病毒性疾病的预防和治疗中。

7、鱼类感染鱼类虹彩病毒后造血组织坏死，并且虹彩病毒会通过水平感染的方式在鱼群中传播，对鱼类养殖的健康发展产生负面影响。而本发明通过相关的实验探究发现，五倍子醇提取物与槲皮苷配合可以对鱼类虹彩病毒起到有效的预防及治疗作用。具体地，五倍子醇提取物的生物毒性对石斑鱼的影响可以忽略不计；并且，五倍子醇提物可对石斑鱼虹彩病毒的病毒粒子结构产生破坏，对石斑鱼虹彩病毒侵染宿主细胞的吸附、侵入及复制过程产生干扰，从而达到抗石斑鱼虹彩病毒的效果。而五倍子醇提取物与槲皮苷配合后，不仅可以直接与石斑鱼虹彩病毒相互作用发挥直接抗病毒作用，也可以在预处理细胞时激活宿主细胞的抗病毒免疫反应而发挥间接的抗病毒作用，还可以作用于病毒感染后的细胞，以抑制石斑鱼虹彩病毒对石斑鱼更进一步的感染。

8、由此可见，本发明利用五倍子醇提取物与槲皮苷制备抗鱼类虹彩病毒药物，不仅能够对已经感染虹彩病毒的鱼类起到治疗作用，并且还能够对鱼群中未感染虹彩病毒的鱼类起到预防感染虹彩病毒的效果，阻断虹彩病毒在鱼群中的水平感染，显著降低虹彩病毒在鱼群中的传播，有助于鱼群的健康生长。

9、优选地，所述鱼类虹彩病毒为石斑鱼虹彩病毒。

10、石斑鱼虹彩病毒发病周期长，严重时会持续1-2个月，疾病爆发7-10天内死亡率高达60％-100％，且目前市场上尚未出现可以有效地预防/治疗感染石斑鱼虹彩病毒的药物。本发明中利用五倍子醇提取物与槲皮苷配合制备抗石斑鱼虹彩病毒药物，对石斑鱼虹彩病毒有显著的预防和治疗作用，并且降低石斑鱼产生耐药性的情况，也不会在石斑鱼体内出现药物残留，在预防和治疗石斑鱼虹彩病毒的过程中不会恶化养殖环境，有助于促进石斑鱼养殖产业的健康发展。

11、第二方面，本发明提供一种抗鱼类虹彩病毒药物，采用如下的技术方案：

12、一种抗鱼类虹彩病毒药物，包括五倍子醇提取物和槲皮苷。

13、优选地，所述五倍子醇提取物采用包括如下步骤的方法制备得到：s1，将五倍子制成粉末，将五倍子粉末与石油醚混合，于加热条件下进行第一超声操作，第一超声操作结束后进行固液分离，继续将所得固体产物与石油醚混合，并重复上述超声操作，得到第一预处理固体产物；s2，将所述第一预处理固体产物与甲醇混合，于加热条件下进行第二超声操作，第二超声操作结束后进行固液分离，继续将所得固体产物与甲醇混合，并重复上述超声操作，继续固液分离得到第二预处理液体产物；s3，将所述第二预处理液体产物进行减压蒸馏，所得产物烘干后得到所述五倍子醇提取物。

14、优选地，所述五倍子醇提取物的制备方法中：s1中，每1g所述粉末与10-15ml石油醚混合，混合时间为0.8-1.3h；第一超声操作的条件为1h内超声2-4次，每次超声持续4-6min，超声过程中的温度为58-62℃；第二次混合加入的石油醚与第一次混合加入的石油醚的体积相同；s2中，将所述第一预处理固体产物与甲醇混合，甲醇的体积与s1中第二次混合加入的石油醚的体积相同；混合时间为0.8-1.3h；第二超声操作的条件为1h内超声2-4次，每次超声持续4-6min，超声过程中的温度为58-62℃；第二次混合加入的甲醇与第一次混合加入的甲醇的体积相同；s3中，减压蒸馏过程中的温度为58-62℃。

15、第三方面，本技术提供一种抗鱼类虹彩病毒药物的使用方法，采用如下的技术方案：

16、一种抗鱼类虹彩病毒药物的使用方法，包括如下步骤：利用五倍子醇提取物配制五倍子醇提取物溶液，将所述五倍子醇提取物溶液用于预防或者治疗鱼类虹彩病毒；所述五倍子醇提取物溶液中，所述五倍子醇提取物溶液的浓度为3.125μg/ml-12.5μg/ml；利用槲皮苷配制槲皮苷溶液，将所述槲皮苷溶液用于预防或者治疗鱼类虹彩病毒；所述槲皮苷溶液中，所述槲皮苷的浓度为20μg/ml-100μg/ml；所述五倍子醇提取物溶液的体积与所述槲皮苷溶液的体积的比值为0.3-0.6：1。

17、优选地，将所述五倍子醇提取物溶液溶于二甲基亚砜(dmso)中，随后利用l15培养基进行稀释，得到目标浓度的五倍子醇提取物溶液；将所述槲皮苷溶于二甲基亚砜(dmso)中，随后利用培养基进行稀释，得到目标浓度的槲皮苷溶液。

18、通过调整五倍子醇提取物溶液的浓度和槲皮苷溶液的浓度，并调整五倍子醇提取物溶液与槲皮苷溶液的体积用量比，一方面，不仅提高未感染虹彩病毒的石斑鱼预防感染虹彩病毒的效果，从源头上降低鱼群中感染虹彩病毒的个体数目，另一方面，能够显著提高对感染虹彩病毒的石斑鱼的治疗效果。

19、优选地，当鱼类体内无所述鱼类虹彩病毒，所述抗鱼类虹彩病毒药物用于预防鱼类虹彩病毒性疾病，所述五倍子醇提取物的浓度为3.125μg/ml，所述槲皮苷溶液的浓度为20μg/ml；

20、当鱼类体内含有所述鱼类虹彩病毒，所述抗鱼类虹彩病毒药物用于治疗所述鱼类虹彩病毒性疾病，所述五倍子醇提取物的浓度为3.125μg/ml-12.5μg/ml，所述槲皮苷溶液的浓度为20μg/ml-100μg/ml。

21、本发明中通过实验探究得到针对鱼类虹彩病毒对鱼类的感染情况不同，采用不同浓度的五倍子醇提取物溶液与槲皮苷溶液配合，有助于实现对鱼类虹彩病毒的预防和治疗效果。