一种美容可注射交联透明质酸微球的制备方法及其应用与流程

本发明属于生物医用材料，涉及一种注射用交联透明质酸填充剂的制备方法，特别涉及一种医学美容注射用透明质酸微球长效填充剂的制备方法。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、人类对美的追求是一个永恒的话题。随着人的年龄增长，人体衰老是一个不得不面对的现实，抗衰或延缓衰老成为时代的潮流。人体衰老包括面部、臀部、胸等部位，例如，面部衰老的特征主要包括软组织缺失、胶原蛋白流失、皮肤水合度下降等，进而造成脸部细纹、皱纹的产生。为对抗这种不可逆的衰老现象，可注射填充技术应运而生，以此来填补凹陷皮肤或通过异物刺激肌肉和胶原蛋白的再生长，如透明质酸钠、胶原蛋白等，其中，透明质酸钠的应用最为广泛，但由于天然透明质酸钠水凝胶存在稳定性差、对透明质酸酶和自由基敏感，在体内保持时间短、机械强度差等不足，因此通常对其进行化学修饰和交联，进而获得了一系列新型的具有生物活性和功能性的透明质酸钠凝胶。为达到长期填充效果，人们也尝试使用合成生物材料，如聚乳酸、聚己内酯等，具有良好的生物相容性、抗凝血性、无毒和低免疫性等优点，但仍存在一定注射风险，如红肿、麦芽肿、过敏炎症等。因此，需求一种安全可靠的填充剂是医美注射产业中的关键科学问题。

3、透明质酸钠作为传统的医美可注射材料，是一种天然存在于人体组织中的多糖，其与人体的生理环境相容性极高，几乎不存在引起过敏或排斥反应的风险，并在注射后会逐渐被人体吸收代谢，由此赋予其以可调性和可逆性，从而在医美过程中可根据个人需求进行调整或修饰。透明质酸钠的功能化或交联是实现其长效性的可靠途径之一。交联透明质酸钠凝胶国内外已经研究多年，市场上已有在售产品，如restylane、juvederm等品牌。交联透明质酸凝胶主要的制备方式是透明质酸在碱性条件下与交联剂反应后形成凝胶，得到的块状凝胶，通常是经机械粉碎或施压通过筛网来获得不同粒径规格，这种方式制备的交联透明质酸凝胶都存在交联程度不均一，颗粒形态不规范及粒径不均一等问题，用于面部填充容易因表面不规则引起红肿等副反应，此外，颗粒大小不一，造成一定注射阻力，给使用者带来疼痛感或破坏体验感。交联透明质酸凝胶的微球化是解决该问题的有效途径，交联透明质酸微球呈圆润的球状，表面光滑无棱角，流动性良好，提升患者体验感，也大大减少了面部填充副反应的发生。交联透明质酸微球是一种三维空间立体结构，植入体内后，被机体吞噬细胞和巨大细胞包围，成为细胞立体生长支撑载体，有利于纤维细胞生长和刺激胶原蛋白生成，使凹陷部位逐渐被填充。此外，真皮内纤维素增生产生想要的美容效果，随着时间的增加使真皮层增厚，填充部位完全被新生的自体组织代替，得到一个长效美容的效果。

4、目前，透明质酸微球的制备方法有两种：一是先乳化造粒后固化成型，二是先交联后造粒。公开号为ep2225281的专利描述了一种乳液中交联透明质酸微珠的制备方法，该方法获得的微球形态均一，粒径分布在1nm～1μm之间，但最后获得的交联透明质酸微珠未进行有效的油相残留和交联剂残留控制措施，而且生物相容性以及保水性能仍不理想，存在产品不稳定等问题，不能很好地满足市场需求。cn104387600a公开了一种面部注射用复合交联透明质酸钠凝胶微球的制备方法，先将透明质酸凝胶加入乳化液乳化后再向乳化液中加入交联剂进行交联，这种方法需要大量的交联剂，并且交联剂很难渗透到凝胶内部而外泄在微球体外，导致交联效率不高，交联不均匀，或存在球间交联现象(黏连)，微球的机械性能不高，而且容易破碎。cn10318902a公开了一种面部注射用复合交联透明质酸钠凝胶微球的制备方法，该方法将经二次交联的透明质酸钠凝胶破碎、洗涤、过滤得到交联透明质酸钠微球，操作难度大，很难实现微球制备。cn115770528a公开了一种阳离子化透明质酸微球的制备方法，用壁材将透明质酸类物质进行包裹，进而通过氨解反应得到阳离子化微球应用于纺织面料整理剂中，但对制备医学美容注射用透明质酸微球的问题未有涉及，且为简单的物理聚集体(即非化学交联体系)。cn117018288a公开了一种注射用透明质酸微球的制备方法，该方法采用简单的乳化形式，存在交联剂外泄或微球间交联，进而微球分布不佳、粒度不均一等问题。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供一种美容可注射交联透明质酸微球的制备方法。本发明以交联透明质酸微球将透明质酸(盐)、交联剂为内水相、以聚酯类生物高分子膜材的有机溶剂溶液为油相，构建w/o/w型复乳的微球制备体系，在该均匀的交联微环境，反应条件温和可控，能有效防止内水相中的交联剂外泄而降低其用量，交联度均一，所得到微球机械强度更高、弹性好。

2、一方面，发明的外壁材(聚酯)作为一种定型剂、隔离器，在成球初期，形成w/o/w“微区域(密室)”，交联剂交联透明质酸，且有效防止交联剂外泄、有效解决微球间的粘连，另一方面，外壁材作为一种牺牲材料，在微球形成后，通过有机溶液洗涤而除去，同时，将残留的交联剂亦除去；一举多得；且所获得交联透明质酸微球质量优于外壁材存留所制的微球。

3、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

4、本发明的第一个方面，提供了一种美容可注射交联透明质酸微球的制备方法，包括：

5、将透明质酸(盐)溶于水中，加入交联剂，为内水相，所述内水相中透明质酸(盐)的质量浓度为1～10％；

6、将聚酯类生物高分子溶于有机溶剂中，为油相，所述油相中高分子的质量浓度为1～5％；

7、以溶有一定浓度的表面活性的水溶液为外水相；

8、将所述内水相的ph调至11～13，加入所述油相，高速搅拌下，得到w/o型乳状液；

9、在机械搅拌条件下，将所述w/o型乳状液加到所述外水相中，得到w/o/w型复乳；

10、将所述w/o/w型复乳在室温下搅拌4～6h，将有机溶液挥发，得到聚酯类高分子包裹透明质酸复合微球混悬液；再于低温下搅拌，继续交联反应12～24h，静置、离心，得到透明质酸复合微球；洗涤以去除复合微球外层高分子包衣膜、未反应的交联剂、冷冻干燥，得到交联透明质酸微球。

11、在一些实施方式中，所述透明质酸(盐)为透明质酸、透明质酸钠、透明质酸锌或透明质酸钙中的一种或多种。

12、在一些实施方式中，所述交联剂选自三偏磷酸钠、1,4-丁二醇缩水甘油醚、聚乙二醇缩水甘油醚、二乙烯基砜(dvs)中的一种或多种；优选为1,4-丁二醇缩水甘油醚。

13、在一些实施方式中，所述交联剂与透明质酸(盐)的质量比为1：4～10。

14、在一些实施方式中，所述聚酯类生物高分子为聚乳酸、聚已内酯、聚羟基乙酸、聚乳酸-乙醇酸共聚物中的一种或多种。优选为聚乳酸。

15、在一些实施方式中，所述有机溶剂为二氯乙烷、正己烷、乙酸乙酯中的一种。

16、在一些实施方式中，所述内水相与油相的体积比为1：2～5。

17、在一些实施方式中，所述表面活性剂为司盘-80、吐温-20、聚乙烯醇中的一种或多种；

18、在一些实施方式中，所述外水相中，表面活性剂的质量浓度1～5％。

19、在一些实施方式中，所述w/o型乳状液与外水相的体积比为1：4～8；

20、在一些实施方式中，采用有机溶媒、水洗涤透明质酸复合微球；

21、在一些实施方式中，所述有机溶媒为二氯乙烷、环己烷、乙酸乙酯中的一种或多种。

22、更具体的，包括：

23、(1)将透明质酸(盐)溶于去离子水中，加入交联剂，为内水相，所述内水相中透明质酸(盐)的质量浓度为1～10％；

24、(2)以聚酯类生物高分子为膜材，溶于有机溶剂中，为油相，所述油相中高分子的质量浓度为1～5％；

25、(3)以溶有一定浓度的表面活性的去离子水溶液为外水相；

26、(4)用2mol/l氢氧化钠溶液将内水相的ph调至11～13，并迅速加入油相中，在1000～2000rpm高速搅拌下，得到w/o型乳状液；

27、(5)将上述w/o型乳状液加到在600～900rpm转速搅拌下的外水相中，制成w/o/w型复乳；室温下搅拌4～6h，将有机溶液挥发得到聚酯类高分子包裹透明质酸复合微球混悬液；于低温下缓慢搅拌，继续交联反应12～24h；经静置、离心得到透明质酸复合微球；再分别用有机溶媒、去离子水洗涤去除复合微球外层高分子包衣膜、未反应的交联剂等杂质，经冷冻干燥，得到交联透明质酸微球，粒径为20～60μm。

28、本发明的第二个方面，提供了上述方法制备的美容可注射交联透明质酸微球，粒径为20～60μm。本发明的反应条件温和可控，有效防止微球的黏连和团聚，粒度分布均一、尺寸大小可控可调，交联度均一，具有良好的机械强度与弹性，抗酶解能力强，有利于在体内维持更长时间，可以用于载药微球和美容填充领域，具有广阔的应用前景和市场价值。

29、本发明的第三个方面，提供了上述方法制备的美容可注射交联透明质酸微球在载药微球和美容填充领域中的应用。

30、本发明所制得的交联透明质酸微球可用于医美健康领域，将冻干后的交联透明质酸微球均匀分散于交联透明质酸、羟甲基纤维素钠(cmc)或甘露醇与羟甲基纤维素钠混合液中，适当添加盐酸利多卡因，制备可注射含交联透明质酸微球的医美填充剂，用于嘴唇、脸颊、下巴等面部部位或身体其他部位填充，具有修复受损肌肤、改善皱纹、保湿润肤等作用。

31、本发明的有益效果

32、(1)本发明所提供的可注射交联透明质酸微球的制备方法，构建了w/o/w型复乳的微球制备体系，一方面，内水相中的透明质酸(盐)、交联剂分布均匀，为高度、均一交联提供了有效保障；另一方面，油相形成了一层保护膜层，有效地防止了交联剂外泄，提高其利用效率，有效地防止了微球黏连或微球间交联，保护层还具有保护内层微球避免受到高剪切力的破坏，提升了微球的交联度。

33、(2)本发明所提供的可注射交联透明质酸微球的制备方法，工艺稳定，可操作性强，适宜产业化生产。

34、(3)本发明所提供的可注射交联透明质酸微球，粒度分布均一、尺寸大小可控可调，交联度均一，具有良好的机械强度与弹性，流动相好，抗酶解能力强，有利于在体内维持更长时间，可以用于载药微球和美容填充领域，具有广阔的应用前景和市场价值。

35、(4)本发明制备方法简单、实用性强，易于推广。