一种由CpGODN和抗菌肽形成的微纳粒子及其在免疫中的应用的制作方法

本发明涉及生物医药，尤其涉及一种由cpg odn和抗菌肽形成的微纳粒子及其在免疫中的应用。

背景技术：

1、免疫佐剂简称佐剂，即非特异性免疫增强剂，指同抗原一起或预先注入机体内能增强机体对抗原的免疫应答能力或改变免疫应答类型的辅助物质。佐剂可以具有免疫原性，也可无免疫原性。佐剂的免疫生物学作用包括增强免疫原性、增强抗体的滴度、改变抗体产生的类型、引起或增强迟发超敏反应等。由于免疫佐剂具有增强免疫应答的作用，故其应用广泛，其用途主要包括：①作为非特异性免疫增强剂，用于抗感染和抗肿瘤的辅助治疗；②增强特异性免疫应答，用于预防接种和制备动物抗血清等。理想的免疫佐剂应具有以下特点：对于特定的动物，要具有较小的副作用；佐剂作用要持久稳定；生产成本要尽量低；产生的免疫应答反应要适当，最好能够诱导机体细胞或体液免疫的强度要能达到保护要求等。研发高效低毒，能够提高机体免疫水平、细胞因子分泌和免疫记忆的新型免疫佐剂是目前研究的热点之一。

2、cpg odn是人工合成的含有非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(cpg)的寡脱氧核苷酸(odn)，能够与树突状细胞、b细胞、单核细胞及巨噬细胞等免疫细胞内质网膜上的toll样受体9(tlr-9)结合，通过产生th1型免疫反应和分泌促炎因子来增强免疫应答的强度，在机体抵抗病原入侵和抗肿瘤等方面起到免疫增强剂的作用。cpg odn在抗细菌、抗病毒、抗过敏反应等疾病的预防和治疗领域有很好的应用前景。但是，由于cpg半衰期短，并且特异性较低，因此本发明对此进行改进。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明利用抗菌肽hc-cath与cpg odn在特定条件下形成纳米级或微米级粒子，该粒子的形成提高了cpg的特异性和稳定性，且相比单独抗菌肽hc-cath作为佐剂或联用hc-cath与cpg odn作为佐剂的方式有显著效果提升，作为新型免疫佐剂具有良好的前景。

2、本发明的第一个目的是提供一种免疫佐剂，所述免疫佐剂中含有纳米粒或微米粒，所述纳米粒或微米粒由seq id no.1所示抗菌肽与seq id no.2所示cpg odn以不低于5:1的质量比混合孵育得到。

3、进一步地，所述抗菌肽与cpg odn的质量比不低于5:1，如5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1等。当然，包括但不限于以上比例，最优选为5-20:1。

4、进一步地，所述混合孵育包括：按设定配比将抗菌肽与cpg odn于含有山梨醇的tris-hcl缓冲液中孵育。

5、进一步地，在30℃-40℃下孵育至少10min。

6、进一步地，所述tris-hcl缓冲液的ph优选为6.5-8.0，如6.8、7.0、7.1、7.2、7.3、7.5、7.7、7.9、8.0等，包括但不限于以上ph值。

7、进一步地，所述山梨醇在体系中的浓度为200-350mm，如210mm、220mm、230mm、240mm、250mm、260mm、270mm、280mm、290mm、300mm、310mm、320mm、330mm、340mm等，包括但不限于以上浓度，最优选为250-280mm。当体系中含有山梨醇时形成微纳粒子，可能与其能够维持多肽结构、减少聚集、增加溶解度有关。

8、本发明的第二个目的是提供一种免疫佐剂的制备方法，包括以下步骤：按配比将seq id no.1所示抗菌肽与seq id no.2所示cpg odn与含有山梨醇的tris-hcl缓冲液混合，孵育后得到所述免疫佐剂。

9、本发明的第三个目的是提供一种微纳粒子在制备免疫佐剂中的应用，所述微纳粒子为纳米级或微米级，由seq id no.1所示抗菌肽与seq id no.2所示cpg odn以不低于5:1的质量比混合孵育得到。

10、本发明的第四个目的是提供一种药物组合物，所述药物组合物中含有上述免疫佐剂。

11、进一步地，所述药物组合物中还含有抗原，如制备成疫苗。

12、本发明的第五个目的是提供上述免疫佐剂在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用。

13、进一步地，所述预防或治疗肿瘤的药物中含有肿瘤相关抗原，优选为肿瘤特异性抗原。

14、本发明的第六个目的是提供上述免疫佐剂在制备抗感染药物中的应用。

15、进一步地，所述抗感染药物中含有病毒抗原或细菌抗原，所述抗感染药物用于抗病毒感染和/或抗细菌感染。

16、借由上述方案，本发明至少具有以下优点：

17、本发明的发明人意外发现，当将来源于爬行动物青环海蛇的抗菌肽hc-cath与cpgodn能在一定条件下形成微纳粒子并保持稳定，将其作为免疫佐剂时具有明显的效果优势，拓展了hc-cath的应用领域，且两者形成微纳粒子之后相对于单独使用hc-cath、cpg odn或两者联用的效果更佳，提高了抗体的免疫滴度和动物抗感染能力，可以用于制备抗体、疫苗、免疫治疗药物或免疫激活剂。

18、上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细附图说明如后。

1.一种免疫佐剂，其特征在于，所述免疫佐剂中含有纳米粒或微米粒，所述纳米粒或微米粒由seq id no.1所示抗菌肽与seq id no.2所示cpg odn以不低于5:1的质量比混合孵育得到。

2.根据权利要求1所述的免疫佐剂，其特征在于，所述混合孵育包括：按设定配比将抗菌肽与cpg odn于含有山梨醇的tris-hcl缓冲液中孵育。

3.根据权利要求2所述的免疫佐剂，其特征在于，至少包含以下特征中的一项：

4.一种免疫佐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按配比将seq id no.1所示抗菌肽与seq id no.2所示cpg odn与含有山梨醇的tris-hcl缓冲液混合，孵育后得到所述免疫佐剂。

5.一种微纳粒子在制备免疫佐剂中的应用，其特征在于，所述微纳粒子为纳米级或微米级，由seq id no.1所示抗菌肽与seq id no.2所示cpg odn以不低于5:1的质量比混合孵育得到。

6.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中含有权利要求1-3任一项所述免疫佐剂或权利要求4所述制备方法制备得到的免疫佐剂。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中还含有抗原。

8.权利要求1-3任一项所述免疫佐剂或权利要求4所述制备方法制备得到的免疫佐剂在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用。

9.权利要求1-3任一项所述免疫佐剂或权利要求4所述制备方法制备得到的免疫佐剂在制备抗感染药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗感染药物用于抗病毒感染和/或抗细菌感染。