组合、治疗用途和预防用途的制作方法

本发明涉及组合，诸如组合物，及其治疗和预防用途。具体地(尽管不排他地)本发明涉及一种通过对微生物的选择性来调节或治疗犬科动物的微生物群系的新方法。更具体地，本发明涉及通过向口腔施用乳蛋白组合来调节或治疗犬科动物的微生物群系的新方法。

背景技术：

1、动物体内寄生着各种各样的微生物——共生体和病原体两者。共生微生物是那些与宿主生物和谐共存的微生物，它们利用食物或其他益处，而不伤害宿主，并且通常有益地帮助宿主。相反，病原微生物，包括细菌、真菌或病毒，是在侵入身体后通常导致感染和相关病症或疾病的生物。有时，有益的共生微生物可能会趁机变为病原性，在这种情况下，共生体可以被称为“机会性共生体”。

2、总的来说，术语微生物区系(microbiota)描述了生活在动物体表或体内的共生体和病原微生物的群落。术语微生物群系(microbiome)与微生物区系相关，但通常被认为描述微生物的集体基因组(collective genome)，而不是微生物本身。在本说明书中，我们将使用术语微生物群系，但这应理解为涵盖微生物的遗传和/或表型多样性。

3、微生物群系可能非常多样化，并且存在于身体的许多区域，包括皮肤、胃肠道的不同区域(从口腔或口到直肠、鼻腔、耳朵、肺和阴道)。每个部位的不同环境导致微生物为了存活而竞争和适应。此外，在健康宿主中，先天机制有助于选择性地促进与病原微生物相对的共生体或有益健康的微生物的存活。

4、研究表明，健康的微生物群系对于碳水化合物和蛋白的代谢、免疫系统的发育、上皮的功能、激素的产生、维生素的产生、病原体的保护和脂肪的储存非常重要。(hooper etal,2004,stappenbeck et al,2004)。

5、在口中，牙周病被认为是特定致病性细菌的感染，然而许多牙周细菌现在被认为是永久性共生细菌，而不是短暂的病原体。人类口腔的微生物区系由多种细菌物种组成，该细菌通常与宿主以共生和谐存在。例如，牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis)可以从健康个体中分离出来，但在患有炎症和骨质流失的一些个体中却与严重的牙周病有关。与人类口腔相比，犬类口腔表现出不同的微生物群系。例如，与人类口腔相比，低蔗糖饮食和其他拮抗链球菌属(streptococcus app.)被认为会导致犬科动物中变形链球菌(streptococcus mutans)的水平大幅降低。牙龈卟啉单胞菌通常被认为是犬类口腔中病原性的。

6、随着对微生物群系的重要性的了解，研究人员一直在研究如何调节微生物群系，以维持或改善整体健康、防御或治疗感染及相关疾病或病症。

7、最依赖的方法是使用抗生素，这对现代医学有帮助作用，既可以对抗可能杀死宿主的感染，也可以在没有随后感染和死亡的重大风险的情况下进行手术。然而，除了产生耐药性之外，抗生素的一个主要缺点是抗生素几乎没有选择性——这使得药物基本上杀死了所有微生物群系，包括有益的共生体。考虑到前面讨论的微生物群系的重要功能，这是不希望的。

8、其他方法包括使用益生元和益生菌，它们被认为有助于调节微生物群系。益生元旨在为共生体提供最佳的生长条件。益生菌包括实际的微生物，其目的是用特定的物种丰富身体的微生物群系，从而产生明显的有益效果。合生元(synbiotic)包括益生素和益生菌的组合。尽管这些方法具有前景，但目前几乎还没有多少科学证据表明调节微生物群系对于实现关键的预期健康结果具有治疗有效性。此外，尽管益生素和益生菌可能有助于增强系统的防御系统，但它对于治疗已经出现的感染几乎没有效力。

9、wo 2014/159659描述了一种使用螯合剂和碱来选择性地靶向牙科疾病中的病原菌的组合物。许多潜在的化合物被列为潜在的增强剂，它们没有任何特定的抗微生物作用，但以某种方式增强了螯合剂或碱的作用。然而，大多数增强剂并未经过研究或示出可以提高治疗有效性。此外，没有提示wo 2014/159659中使用的组合物对牙科环境之外的微生物群系具有选择性。

10、wo 2011022542描述了尝试通过依赖于对每个微生物群系部位(例如口、皮肤和气道)特异的宿主衍生因子来开发具有改进的选择性的组合物。例如，它公开了使用唾液消化产物如麦芽糖、麦芽三糖和糊精来选择性地调节和促进口中的共生体。它还广泛地建议了可能具有额外益处的一系列其他化合物。提供了七种实例组合物，但没有分析这些组合物是否有效地起作用或对共生体与病原微生物是否具有任何选择性。此外，wo 2011022542教导了针对每个治疗部位开发具有不同活性剂的特定组合物。这可以被视为复杂且不期望的系统，它需要在不同部位使用非常不同的组分作为活性成分。

11、另一项不同方向的科学研究调查了所有哺乳动物全身普遍存在的先天防御系统的蛋白和肽。它是抵御病原体侵袭的第一道防御，始终存在于身体的所有部位，并且独立于全身适应性免疫系统。它是非炎性的，因为它不会引发细胞因子的产生；并且是抗炎性的，因为它会吸收自由基。

12、先天防御系统在眼睛、口和呼吸道中尤其重要，这其中有害病原体进入的风险很高。这些区域受到恒定流动的液体(眼泪、唾液和黏液)的保护，这些液体包含高浓度的先天系统的蛋白、肽和防御肽，以及由过氧化物酶产生次硫氰酸根/盐所需的底物诸如硫氰酸根/盐。

13、在这一类别下，ep 0614352描述了一种洁齿剂组合物，其把控氧化还原酶及其底物，以便在施用后产生过氧化氢，从而通过次硫氰酸根离子的产生提供抗微生物作用。提供了许多氧化还原酶选项，包括作为优选酶的葡萄糖氧化酶连同其优选底物葡萄糖。如实例e所示，还可以添加其他成分例诸如过氧化物酶以尝试在过氧化氢存在下将硫氰酸根离子转化为次硫氰酸根离子。尽管示出组合物产生过氧化氢，但没有证据表明是否有任何组合物对病原微生物而不是共生体赋予任何程度的选择性。也没有数据支持添加过氧化物酶是否改善或赋予任何选择性。此外，使用了多种合成赋形剂，并且在配制组合物之前似乎需要分离或来源每种单独的组分。

14、作为另一个实例，us 08/480,357描述了选择性靶向病原微生物的方法，而对共生体明显缺乏抑制。该文献强调，在过氧化物生成剂(例如葡萄糖氧化酶)和卤化物(卤根)(诸如cl-或br-)存在的情况下，髓过氧化物酶对某些病原体具有一定的选择性，同时明显避免了对特定共生体的抑制。然而，就病原体之间的选择性和效力而言，髓过氧化物酶和其他测试的过氧化物酶之间存在很大差异，结合数据通常与抑制结果相矛盾或表明对特定病原体的选择性较差。相比之下，乳过氧化物酶示出非常差的结合选择性(如表13所示)，表明它几乎没有抑制或选择性，尽管作者没有实际测试。充其量，us 08/480,357可以激励读者探索髓过氧化物酶(或者可能是根据权利要求1中所要求保护的发明的嗜酸性粒细胞过氧化物)与过氧化物和卤素一起使用以实现所报道的结果。无论如何，该文献并未报告在大范围的病原菌中的理想选择性结果，并且对大范围的共生体缺乏抑制作用。

15、就乳腺而言，其先天防御系统的所有组分都已被广泛研究，特别是来自乳的主要组分，诸如乳铁蛋白、乳过氧化物酶和血管生成蛋白(核糖核酸酶)。有许多出版物描述了这些蛋白对抗细菌、酵母、真菌和病毒的活性。然而，这些出版物都没有教导针对共生体和病原体之间的选择性，或使用这些组分来调节微生物群系。

16、总之，需要开发新的方法来有效调节微生物群系，而不会像抗生素那样刺激和缺乏选择性，并且同样比益生元和益生菌具有更大的效力，以选择性地抑制病原微生物，而不会对有益共生体产生类似的抑制水平。此外，需要解决上面关于wo 2011022542、wo 2014/159659、ep 0614352和us 08/480,357所讨论的缺点。理想情况下，这些方法应依赖天然基组合物来让消费者接受并避免副作用。优选地，这些组分易于来源、提取并且贮存稳定。

17、本发明的目的是解决一个或多个前述问题或者至少为公众提供有用的选择。

18、本发明的其他方面和优点将从仅通过实例给出的随后的描述中变得显而易见。

技术实现思路

1、一方面，本发明提供了包括以下的组合的用途：乳过氧化物酶和至少一种其他组分，其中，所述乳过氧化物酶和至少一种其他组分具有6.8或基本上高于6.8的等电点，并且所述乳过氧化物酶和所述至少一种其他组分是从乳中提取的，以通过向犬科动物的口腔施用所述乳过氧化物酶和所述至少一种其他组分，通过选择性抑制生长或杀死至少一种病原微生物而不相对抑制至少一种共生微生物来调节犬科动物中的微生物群系。

2、一方面，本发明提供了通过选择性抑制生长或杀死至少一种病原微生物而不相对抑制至少一种共生微生物来调节犬科动物的微生物群系的方法，所述方法包括以下步骤：向所述犬科动物的口腔施用包括乳过氧化物酶和至少一种其他组分的组合，其中，所述乳过氧化物酶和至少一种其他组分具有6.8或基本上高于6.8的等电点，并且所述乳过氧化物酶和所述至少一种其他组分是从乳中提取的。

3、一方面，本发明提供了一种治疗或预防犬科动物的病症或疾病的方法，所述病症或疾病与犬科动物体表或体内至少一个部位处的微生物群系具有至少部分病原关联(causative association)，所述方法包括以下步骤：向所述犬科动物的口腔施用包括乳过氧化物酶和至少一种其他组分的组合，其中，所述乳过氧化物酶和至少一种其他组分具有6.8或基本上高于6.8的等电点，并且所述乳过氧化物酶和所述至少一种其他组分是从乳中提取的。

4、优选包括乳过氧化物酶和至少一种其他组分的组合是包括乳过氧化物酶和至少一种其他组分的组合物。

5、优选地，组合诸如组合物包括乳过氧化物酶连同乳铁蛋白、血管生成蛋白和/或溶菌酶样蛋白中的至少一种或多种，所有这些都具有6.8或基本上高于6.8的等电点并且它们是从乳中提取的。

6、优选地，所述组合，诸如所述组合物，包括乳过氧化物酶、静息蛋白(quiescin)和木菠萝凝集素(jacalin)样蛋白和血管生成蛋白，所有这些都具有6.8或基本上高于6.8的等电点并且它们是从乳中提取的。

7、优选地，所述组合，诸如所述组合物，包括乳过氧化物酶、乳铁蛋白、血管生成蛋白和溶菌酶样蛋白、静息蛋白和木菠萝凝集素样蛋白，所有这些均具有6.8或基本上高于6.8的等电点并且它们是从乳中提取的。

8、在一些实施方式中，组合诸如组合物包括组织蛋白酶抑制素-1(cathlecidin-1)和/或血清淀粉样蛋白a。

9、优选地，所述组合，诸如所述组合物，包括从乳中分离的具有6.8或基本上高于6.8的等电点的基本上所有蛋白。

10、总之，发明人已经发现，与对健康犬类微生物群系中存在的有益共生微生物的抑制作用要显著小得多相比，本文所述的组合，诸如如组合物，对抑制犬科动物口腔中的病原微生物具有意想不到的选择性。这一发现提出了调节微生物群系和/或预防或治疗相关病症或疾病的新用途。此外，本发明提供了优于先前治疗方法(诸如不具有高度特异性的广谱抗生素)的显著优点。本发明在以下意义上也是非常有益的：该组合诸如组合物可以使用已知技术容易地生产，并且包括具有广泛的犬接受性和安全性的来源于乳的蛋白。最后，在制造和储存期间能够将乳蛋白的组合分离在一起的便利性似乎也提高了整体抗微生物效果，并且早期迹象表明这也提高了有益选择性谱的保留。

11、优选地，本发明的组合，诸如组合物，用于调节犬科动物的口腔和/或肠道(可以指整个或部分胃肠道(食道、胃、小肠和大肠)的微生物群系。优选地，本发明的组合诸如组合物用于调节至少犬科动物口腔的微生物群系。

12、犬类口腔微生物群系与人类口腔微生物群系存在很大差异(dewhirst fe,kleinea,thompson ec,blanton jm,chen t,milella l,et al.in(2012)the canine oralmicrobiome.plos one 7(4):e36067)。例如，变形链球菌(s.mutans)存在于人类口腔微生物群系中，可能对人类有致龋作用，但在犬类口腔微生物群系中未发现(káthia santanamartins,lorena tirza de assis jeferson geison de almeida,fábioalessandro pieri,"antagonism of bacteria from dog dental plaque against humancariogenic bacteria",biomed research international,vol.2018,article id2780948,6pages,2018.https://doi.org/10.1155/2018/2780948)。作为另一实例，牙龈卟啉单胞菌在专利公开wo 2017183996中被列为共生生物，然而该生物被认为是犬类口腔中的牙周病原体(braz.j.microbiol.38(1)mar 2007)。已经提出了关于这种差异的几种理论，包括“简单的碳水化合物和糖通常不是犬类饮食的主要成分，并且犬类唾液具有的ph为大约8.0(waltham，2011年未发表的数据)，这可能对这种酸属的成员不利”(dewhirst etal.)。其他报告表明，犬科动物的口臭(呼吸臭)可能是牙周病的第一个临床体征，并且口臭可以通过以下来弥补：用龈上洁治和抛光以去除所有牙齿沉积物并在必要时拔牙来治疗牙周病(culham,n.&rawlings,j.m.american society for nutritionalsciences.j.nutr.128:2715s–2716s,1998)。

13、bailie,w.e.et al.in journal of clinical microbiology(1978)7(2)223-231报道了对犬类微生物群系多样性(特别是鼻腔和口腔微生物群系)的进一步研究，展示了人类常见或犬科可能特有的各种范围的微生物。

14、这种差异可能会影响先前已知的抗微生物剂成功且有益地调节犬类口腔微生物群系的能力。