包含miRNA的活性成分及其应用的制作方法

本申请属于生物医药领域，具体涉及包含mirna的活性成分及其应用。

背景技术：

1、衰老是所有生命不得不面对的一个过程，如何找到破解衰老的生物学机制以及找到延缓或逆转衰老的方法和药物，一直是科学界的热门领域，同时，也具有重大社会意义和巨大商业价值。衰老分为个体衰老、器官衰老、细胞衰老几个水平，个体与器官的衰老最终反应在细胞衰老上，从药物研发角度上，得到延缓或逆转细胞衰老的药物再应用于动物中是一种合理的方案。

2、微小rna(microrna，mirna)是一种由内源基因编码的长度在18-25个核苷酸的非编码单链rna分子。mirna涉及多种生物学过程，一种方式是mirna与靶基因互补结合，最终切割靶mrna，第二种方式是与靶基因不完全互补结合，抑制靶基因翻译。

3、mirna的种子序列是进化上最保守的序列，一般是5'端的第2～8个核苷酸。种子序列与靶序列的保守型构成了靶序列预测的模型基础，但目前预测得到的靶序列仍需要进行实验验证。

4、目前，缺乏逆转衰老相关的有效治疗mirna药物。

技术实现思路

1、基于此，本申请有必要提供一种活性成分，发现所述活性成分能够逆转衰老过程，例如，恢复衰老细胞重新进入细胞周期或恢复衰老细胞增殖能力。

2、具体技术方案如下：

3、本申请提供了一种活性成分，所述活性成分包括如下至少一组：

4、(1)mir-302/mir367家族的mirna、或经修饰的mir-302/mir367家族的mirna衍生物、或mir-302/mir367家族的mirna模拟物；

5、(2)前体mirna，所述前体mirna能在宿主内加工成(1)中所述的mirna；

6、(3)多核苷酸，所述多核苷酸能被宿主转录形成(2)中所述的前体mirna，并加工形成(1)中所述的mirna；

7、(4)表达载体，所述表达载体含有(1)中所述的mirna、或(2)中所述的前体mirna、或(3)中所述的多核苷酸；

8、(5).(1)中所述mirna的激动剂。

9、在其中一个实施例中，所述mirna来源于人或其他动物。可选的，所述其他动物包括灵长类及其他哺乳动物、两栖动物和鸟类中的一种或多种。可选的，所述其他动物包括猴子、猫、狗、小鼠和大鼠中的一种或多种。

10、在其中一个实施例中，所述mir-302/367家族的mirna包括mir-302a、mir-302b、mir-302c、mir-302d、mir-302e、mir-302f和mir-367中的一个或多个。可选的，所述mir-302a包括mir-302a-3p和/或mir-302a-5p；所述mir-302b包括mir-302b-3p和/或mir-302b-5p；所述mir-302c包括mir-302c-3p和/或mir-302c-5p；所述mir-302d包括mir-302d-3p和/或mir-302d-5p；所述mir-367包括mir-367-3p和/或mir-367-5p。

11、在其中一个实施例中，所述mir-302/367家族的mirna选自如下中的一种或多种：hsa-mir-302a-3p、hsa-mir-302b-3p、hsa-mir-302c-3p.1、hsa-mir-302d-3p、hsa-mir-302e、bta-mir-302b、bta-mir-302c、bta-mir-302d、gga-mir-302b-3p、gga-mir-302c-3p、gga-mir-302d、mdo-mir-302a、mdo-mir-302b、mdo-mir-302c、mdo-mir-302d、mml-mir-302a-3p、mml-mir-302b、mml-mir-302c、mml-mir-302d、mmu-mir-302a-3p、mmu-mir-302b-3p、mmu-mir-302d-3p、ptr-mir-302a、ptr-mir-302b、ptr-mir-302c、ptr-mir-302d、ptr-mir-302e、hsa-mir-302a-5p、cfa-mir-302a、mmu-mir-302a-5p、hsa-mir-302b-5p、hsa-mir-302d-5p、cfa-mir-302b、cfa-mir-302d、gga-mir-302b-5p、mmu-mir-302b-5p、mmu-mir-302c-5p、mmu-mir-302d-5p、bta-mir-302a、gga-mir-302a、mmu-mir-302c-3p、hsa-mir-302c-5p、cfa-mir-302c、gga-mir-302c-5p、hsa-mir-302f、ptr-mir-302f、hsa-mir-367-5p、cfa-mir-367、mmu-mir-367-5p、hsa-mir-367-3p、mml-mir-367、mmu-mir-367-3p、ptr-mir-367、gga-mir-367、mml-mir-302a-5p和xtr-mir-367。

12、在其中一个实施例中，所述mir-302/367家族的mirna的核苷酸序列包含如seq idno:1～14中的至少一条所示核苷酸序列。

13、本申请还提供了上述的活性成分在制备逆转衰老的衰老进程的产品中的应用。

14、本申请还提供了上述的活性成分在制备恢复衰老细胞重返细胞周期或细胞增殖能的产品中的应用。

15、在其中一个实施例中，所述衰老细胞为衰老肝细胞。

16、本申请还提供了上述活性成分在制备逆转衰老动物的产品中的应用。

17、在其中一个实施例中，所述衰老动物包括人、猫、狗、大鼠和小鼠中的一种或多种。

18、在其中一个实施例中，所述逆转包括恢复衰老动物的衰老细胞重新返回细胞周期，导致衰老动物逆转衰老。

19、在其中一个实施例中，所述衰老细胞包括衰老肝细胞。

20、本申请还提供了上述的活性成分在制备治疗细胞衰老所致的相关性疾病的产品中的应用。

21、相对于现有技术，本申请具备如下有益效果：

22、本申请通过体外细胞试验和体内动物实验发现mir-302/367家族中的mirna或功能与其基本相同、且具有相同的核心序列的mirna能够逆转已经衰老的细胞，使衰老细胞重新返回细胞周期而增殖，即所谓的“返老还童”，其能够作为逆转衰老的活性成分。

1.活性成分在制备逆转衰老进程的产品中的应用，所述活性成分包括如下(1)～(5)中至少一组：

2.活性成分在制备恢复衰老细胞重新返回细胞周期或恢复衰老细胞的细胞增殖的产品中的应用，所述活性成分包括如下(1)～(5)中至少一组：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述衰老细胞为衰老肝细胞。

4.活性成分在制备逆转衰老动物的产品中的应用，所述活性成分包括如下(1)～(5)中至少一组：

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述衰老动物包括人、猫、狗、大鼠和小鼠中的一种或多种。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述逆转包括恢复衰老动物的衰老细胞重新返回细胞周期，导致衰老动物逆转衰老；

7.根据权利要求1至5中任一项所述的应用，其特征在于，所述mir-302b包括mir-302b-3p和/或mir-302b-5p；

8.根据权利要求1至5中任一项所述的应用，其特征在于，(2)中所述的前体mirna或(3)中所述的多核苷酸或(4)中所述的表达载体包含如seq id no:3～4中至少一条所示的核苷酸序列。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的应用，其特征在于，(4)中所述的表达载体为病毒载体或非病毒载体。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述病毒载体包括逆转录病毒载体、慢病毒、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、甲病毒载体、杆状病毒和痘苗病毒中的一种或多种；和/或，

11.根据权利要求1至5以及10中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括所述的活性成分和辅料。

12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、ph值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂和释放阻滞剂中的一种或多种。

13.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述产品的剂型包括注射剂、口服液体剂、悬浮液、乳化液、浸膏剂、粉末剂、颗粒剂、栓剂、气雾剂、转染剂、片剂和胶囊剂中的一种或多种。