一种治疗癌症的联用药物的制作方法

本发明涉及β榄香烯在治疗癌症的联用药物，涉及医药领域。

背景技术：

1、癌症是目前威胁人类健康的主要疾病，我国每年大约180万患者发病且发病率逐年上升。目前癌症治疗主要以手术、化疗和放疗为主。然而，现阶段临床使用的大量化疗药物仍存在全身毒副作用大、耐药且选择不强的问题，近年来，大量的临床和实验研究证明，中医药和联合药物疗法在肿瘤的防治和康复方面有特效，已渐成为人们关注的焦点。

2、β榄香烯是莪术油、香茅草油的主要成分，现已被广泛地用于治疗癌症。现已报道榄香烯可以同吉非替尼、塞来昔布等抗肿瘤药物合用，以提高上述物质的对肿瘤细胞生长抑制活性的效果。

3、为了尽快满足癌症患者的治疗需求，亟待开发更多具有临床价值的联合用药剂型和给药方式。

技术实现思路

1、本发明提供了一种治疗癌症的联合用药物，所述联合用药物包含β榄香烯和第二种药物，所述联合用药物为单一的复方制剂或两种单独的制剂的组合，所述第二种药物选自于伊立替康、依维莫司、依西美坦。

2、进一步的，所述第二种药物为伊立替康，所述的伊立替康和β榄香烯的摩尔比为小于1:4，优选小于1:7，优选1:1000-1:4，优选1:1000-1:7，优选1:1000-1:28，优选1:1000-1:55，优选1:1000-1:111，优选1:1000-1:444，优选1:444-1:4，优选1:444-1:7，优选1:444-1:28，优选1:444-1:55，优选1:444-1:111，优选1:111-1:4，优选1:111-1:7，优选1:111-1:28，优选1:111-1:55，优选1:55-1:4，优选1:55-1:7，优选1:55-1:28，优选1:28-1:4，优选1:28-1:7，优选1:7-1:4。

3、进一步的，所述的伊立替康和β榄香烯的摩尔比为1:1000、1:444、1:111、1:55、1:14、1:10、1:7。

4、进一步的，所述第二种药物为依维莫司，所述的依维莫司和β榄香烯的摩尔比为1:1000000-1:0.1，优选1:1000000-1:0.5，优选1:500000-1:0.5，优选1:500000-1:100，优选1:500000-1:1000，优选1:500000-1:5000，优选1:500000-1:10000，优选1:500000-1:20000，优选1:500000-1:31250，优选1:500000-1:125000，优选1:500000-1:250000，优选1:250000-1:0.5，优选1:250000-1:100，优选1:250000-1:1000，优选1:250000-1:5000，优选1:250000-1:10000，优选1:250000-1:20000，优选1:250000-1:31250，优选1:250000-1:125000，优选1:125000-1:0.5，优选1:125000-1:100，优选1:125000-1:1000，优选1:125000-1:5000，优选1:125000-1:10000，优选1:125000-1:20000，优选1:125000-1:31250，优选1:31250-1:0.5，优选1:31250-1:100，优选1:31250-1:1000，优选1:31250-1:5000，优选1:31250-1:10000，优选1:31250-1:20000，优选1:20000-1:0.5，优选1:20000-1:100，优选1:20000-1:1000，优选1:20000-1:5000，优选1:20000-1:10000，优选1:10000-1:0.5，优选1:10000-1:100，优选1:10000-1:1000，优选1:10000-1:5000，优选1:5000-1:0.5，优选1:5000-1:100，优选1:5000-1:1000，优选1:1000-1:0.5，优选1:1000-1:100，优选1:100-1:0.5。

5、进一步的，所述的依维莫司和β榄香烯的摩尔比为1:0.5、1:100、1:1000、1:5000、1:10000、1:20000、1:25000、1:31000、1:31250、1:40000、1:50000、1:60000、1:125000、1:250000、1:300000、1:400000、1:500000。

6、进一步的，所述第二种药物为依西美坦，所述的依西美坦和β榄香烯的摩尔比为1:0.1-1:1000，优选1:7-1:1000，优选1:7-1:14，优选1:7-1:111，优选1:7-1:150，优选1:14-1:111，优选1:14-1:150，优选1:14-1:1000，优选1:111-1:150，优选1:111-1:1000，优选1:150-1:1000。

7、进一步的，所述的依西美坦和β榄香烯的摩尔比为1:10000、1:1000、1:150、1:111、1:14、1:7、1:1、1:0.1。

8、本发明提供了一种治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物的活性成分包含β榄香烯和第二种药物，所述第二种药物选自于伊立替康、依维莫司、依西美坦。

9、进一步的，所述药物组合物的活性成分由β榄香烯和伊立替康组成。

10、进一步的，所述的伊立替康和β榄香烯的摩尔比为小于1:4，优选小于1:7，优选1:1000-1:4，优选1:1000-1:7，优选1:1000-1:28，优选1:1000-1:55，优选1:1000-1:111，优选1:1000-1:444，优选1:444-1:4，优选1:444-1:7，优选1:444-1:28，优选1:444-1:55，优选1:444-1:111，优选1:111-1:4，优选1:111-1:7，优选1:111-1:28，优选1:111-1:55，优选1:55-1:4，优选1:55-1:7，优选1:55-1:28，优选1:28-1:4，优选1:28-1:7，优选1:7-1:4。

11、进一步的，所述的伊立替康和β榄香烯的摩尔比为1:1000、1:444、1:111、1:55、1:14、1:10、1:7。

12、进一步的，所述药物组合物的活性成分由β榄香烯和依维莫司组成。

13、进一步的，所述的依维莫司和β榄香烯的摩尔比为1:1000000-1:0.1，优选1:1000000-1:0.5，优选1:500000-1:0.5，优选1:500000-1:100，优选1:500000-1:1000，优选1:500000-1:5000，优选1:500000-1:10000，优选1:500000-1:20000，优选1:500000-1:31250，优选1:500000-1:125000，优选1:500000-1:250000，优选1:250000-1:0.5，优选1:250000-1:100，优选1:250000-1:1000，优选1:250000-1:5000，优选1:250000-1:10000，优选1:250000-1:20000，优选1:250000-1:31250，优选1:250000-1:125000，优选1:125000-1:0.5，优选1:125000-1:100，优选1:125000-1:1000，优选1:125000-1:5000，优选1:125000-1:10000，优选1:125000-1:20000，优选1:125000-1:31250，优选1:31250-1:0.5，优选1:31250-1:100，优选1:31250-1:1000，优选1:31250-1:5000，优选1:31250-1:10000，优选1:31250-1:20000，优选1:20000-1:0.5，优选1:20000-1:100，优选1:20000-1:1000，优选1:20000-1:5000，优选1:20000-1:10000，优选1:10000-1:0.5，优选1:10000-1:100，优选1:10000-1:1000，优选1:10000-1:5000，优选1:5000-1:0.5，优选1:5000-1:100，优选1:5000-1:1000，优选1:1000-1:0.5，优选1:1000-1:100，优选1:100-1:0.5。

14、进一步的，所述的依维莫司和β榄香烯的摩尔比为1:0.5、1:100、1:1000、1:5000、1:10000、1:20000、1:25000、1:31000、1:31250、1:40000、1:50000、1:60000、1:125000、1:250000、1:300000、1:400000、1:500000。

15、进一步的，所述药物组合物的活性成分由β榄香烯和依西美坦组成。

16、进一步的，所述的依西美坦和β榄香烯的摩尔比为1:0.1-1:1000，优选1:7-1:1000，优选1:7-1:14，优选1:7-1:111，优选1:7-1:150，优选1:14-1:111，优选1:14-1:150，优选1:14-1:1000，优选1:111-1:150，优选1:111-1:1000，优选1:150-1:1000。

17、进一步的，所述的依西美坦和β榄香烯的摩尔比为1:10000、1:1000、1:150、1:111、1:14、1:7、1:1、1:0.1。

18、进一步的，本发明提供了一种包含上述联合用药物的治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的药用辅料，所述辅料包括但不限于注射用油、载体、填充剂、崩解剂、粘合剂、冻干保护剂、ph调节剂、防腐剂、抗氧剂、润湿剂等。所述药物组合物可以制备成制剂，所述制剂可以为片剂、胶囊剂、丸剂、合剂、凝胶剂、软膏剂、颗粒剂、散剂、膏剂、冲剂、丹剂、口服液剂、滴丸剂、针剂或注射剂中的一种或多种，或者任何其他剂型。

19、进一步的，本发明提供了一种上述组合物或药物在制备治疗癌症的联合用药物中的用途。

20、进一步的，所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(nsclc)、恶性黑素瘤、结直肠癌、恶性胸膜间皮瘤、胰腺癌、头颈癌、胃细胞癌、膀胱癌、骨癌、食道癌、脑瘤、肝癌、宫颈癌、癌性胸、腹水，优选所述癌症为乳腺癌、肾细胞癌。

21、具体实施实例

22、下面结合说明书具体实施实例对本发明的技术方案作进一步详细阐述，但本发明的实施不仅限于此。本领域技术人员根据本发明的描述对本发明技术方案进行的等同替换、组合、改良或修饰均应涵盖在本发明的保护范围中。

23、除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市售品。

24、实施例1-3采用下述细胞培养方法进行：

25、细胞培养：人乳腺癌mcf7接种于无菌培养瓶中，加入适量的emem+2mm glu+1％neaa+10％fbs养基，于37℃，5％co2及饱和湿度的培养箱中培养。细胞呈单层贴壁生长，每2～3天传代1次。传代时用0.25％胰蛋白酶+0.02％edta消化培养细胞2～4min，用吸管吸取培养液吹打使细胞制成细胞悬液，然后按照需要的浓度接种。

26、实施例1-4采用下述计算方法：

27、1)双药联合用药效果的判定：

28、采用金正均q值法进行判定(参见文献：戴体俊.合并用药的定量分析[j].中国药理学通报,1998(5):479-480.)。q＝p(a+b)/(pa+pb-pa×pb)。式中pa、pb和pa+b分别为β榄香烯组、第二种药物组和两药联用组抑制率。q＜1说明两药合用后产生拮抗作用；q＞1，说明两药合用后产生协同作用，q＝1说明两药合用后产生相加作用。

29、实施例1

30、将β榄香烯和依西美坦分为：组1：2690umβ榄香烯，组2：403.5umβ榄香烯，组3：300umβ榄香烯，组4：37.5umβ榄香烯，组5：18.75umβ榄香烯，组6:2.69um依西美坦；

31、组7：2690umβ榄香烯+2.69um依西美坦，组8：403.5umβ榄香烯+2.69um依西美坦，组9：300umβ榄香烯+2.69um依西美坦，组10：37.5umβ榄香烯+2.69um依西美坦，组11：18.75umβ榄香烯+2.69um依西美坦。

32、上述组别均采用0.5％dmso作为溶媒。

33、方法：取对数生长期的mcf7细胞，按传代方法制成单细胞悬液，计数，调细胞浓度为：3.34*10^4个/ml。将上述细胞悬液接种于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液：90μl。取不含细胞培养液的孔作为空白调零。将培养板置于37℃，5％co2培养箱中贴壁培养12小时后，组7-11分别加入10μl(5μl不同浓度的β榄香烯和5μl依西美坦)，组1-5加入5μl不同浓度的β榄香烯+5μl 5％dmso培养基，组6加入5μl依西美坦+5μl 5％dmso培养基，溶媒对照为加入10μl 5％dmso培养基。每组设置复孔，分别培养72h后，每孔加50μl的celltiter-glotm试剂，在振荡器上，避光，300rpm/min，3min，静置10min，然后使用全自动酶标仪上测定每孔荧光信号值。

34、结果如表1所示。

35、

36、实施例2

37、将β榄香烯和依立替康分为：

38、组1：300um榄香烯、组2：150um榄香烯、组3：75um榄香烯、组4：18.75um榄香烯、组5：10.76um榄香烯、组6：2.69um依立替康

39、组7：300um榄香烯+2.69um依立替康、组8：150um榄香烯+2.69um依立替康、组9：75um榄香烯+2.69um依立替康、组10：18.75um+2.69um依立替康、组11：10.76um榄香烯+2.69um依立替康

40、上述组别均采用0.5％dmso作为溶媒。

41、方法：取对数生长期的mcf7细胞，按传代方法制成单细胞悬液，计数，调细胞浓度为：3.34*10^4个/ml。将上述细胞悬液接种于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液：90μl。取不含细胞培养液的孔作为空白对照调零。将培养板置于37℃，5％co2培养箱中贴壁培养12小时后，组7-11分别加入10μl(5μl不同浓度β榄香烯和5μl依立替康)，组1-5分别加入5μl不同浓度的β榄香烯+5μl 5％dmso培养基，组6分别加入5μl依立替康+5μl 5％dmso培养基，溶媒对照为加入10μl 5％dmso培养基。每组设置复孔，分别培养72h后，每孔加50μl的celltiter-glotm试剂，在振荡器上，避光，300rpm/min，3min，静置10min，然后使用全自动酶标仪上测定每孔荧光信号值。

42、实验结果如表2：

43、

44、

45、实施例3

46、将β榄香烯和依维莫司分为：

47、组1：500umβ榄香烯、组2：250umβ榄香烯、组3：125umβ榄香烯、组4：31.25umβ榄香烯、组5:20umβ榄香烯、组6：1nm依维莫司。

48、组7：500umβ榄香烯+1nm依维莫司、组8：250umβ榄香烯+1nm依维莫司、组9：125umβ榄香烯+1nm依维莫司、组10：31.25umβ榄香烯+1nm依维莫司、组11：20umβ榄香烯+1nm依维莫司。

49、上述组别均采用0.5％dmso作为溶媒。

50、方法：取对数生长期的mcf7细胞，按传代方法制成单细胞悬液，计数，调细胞浓度为：3.34*10^4个/ml。将上述细胞悬液接种于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液：90μl。取不含细胞培养液的孔作为空白调零。将培养板置于37℃，5％co2培养箱中贴壁培养12小时后，组7-11分别加入10μl(5μl不同浓度的β榄香烯和5μl依维莫司)，组1-5分别加入5μl不同浓度的β榄香烯+5μl 5％dmso培养基，组6分别加入5μl依维莫司+5μl 5％dmso培养基，溶媒对照为加入10μl 5％dmso培养基。每组设置复孔，分别培养72h后，每孔加50μl的celltiter-glotm试剂，在振荡器上，避光，300rpm/min，3min，静置10min，然后使用全自动酶标仪上测定每孔荧光信号值。

51、实验结果如表3所示：

52、

53、实施例4

54、将β榄香烯和依维莫司分为：

55、组1：500umβ榄香烯、组2：250umβ榄香烯、组3：125umβ榄香烯、组4：31.25umβ榄香烯、组5:20umβ榄香烯、组6：10umβ榄香烯、组7:5umβ榄香烯、组8:1umβ榄香烯、组9:0.1umβ榄香烯、组10:0.0005umβ榄香烯、组11：1nm依维莫司；

56、组12：500um umβ榄香烯+1nm依维莫司、组13：250umβ榄香烯+1nm依维莫司、组14：125umβ榄香烯+1nm依维莫司、组15：31.25umβ榄香烯+1nm依维莫司、组16：20umβ榄香烯+1nm依维莫司，组17：10umβ榄香烯+1nm依维莫司、组18：5umβ榄香烯+1nm依维莫司、组19：1umβ榄香烯+1nm依维莫司、组20：0.1umβ榄香烯+1nm依维莫司、组21：0.0005umβ榄香烯+1nm依维莫司。

57、上述组别均采用0.5％dmso作为溶媒。

58、细胞培养方法：细胞培养：人肾细胞癌sk-nep-1接种于无菌培养瓶中，加入适量的mccoy's 5a+15％fbs培养基，于37℃，5％co2及饱和湿度的培养箱中培养。细胞呈单层贴壁生长，每2～3天传代1次。传代时用0.25％胰蛋白酶+0.02％edta消化培养细胞2～4min，用吸管吸取培养液吹打使细胞制成细胞悬液，然后按照需要的浓度接种。

59、方法：取对数生长期的sk-nep-1细胞，按传代方法制成单细胞悬液，计数，调细胞浓度为：5.56*10^4。将上述细胞悬液接种于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬液：90μl。取不含细胞培养液的孔作为空白调零。将培养板置于37℃，5％co2培养箱中贴壁培养12小时后，组12-21分别加入10μl(5μl不同浓度的β榄香烯和5μl依维莫司)，组1-10分别加入5μl不同浓度的β榄香烯+5μl 5％dmso培养基，组11加入5μl依维莫司+5μl 5％dmso培养基，溶媒对照组分别加入10μl 5％dmso培养基。每组设置复孔，分别培养72h后，每孔加50μl的celltiter-glotm试剂，在振荡器上，避光，300rpm/min，3min，静置10min，然后使用全自动酶标仪上测定每孔荧光信号值。

60、实验结果如表4所示：

61、

62、