用于治疗自身免疫性疾病的嵌合抗原受体(CAR)T细胞及相关方法与流程

背景技术：

技术实现思路

1、现成的car-t细胞和其他治疗性细胞可以提供优于基于自体细胞的策略的优势，包括易于制造、质量控制以及避免恶性污染和t细胞功能障碍。然而，针对组织不相容性t细胞的强烈宿主抗移植物免疫反应阻止同种异体car-t细胞的扩增和持续存在，并降低这种途径的功效。

2、在动物模型和人患者中都有大量证据表明，低免疫原性细胞移植是一种科学可行并且临床上有前途的治疗多种病症、病状和疾病，特别是治疗自身免疫性疾病/病症和/或炎性疾病/病症的途径。

3、仍然需要用于产生避免被受体的免疫系统检测的基于细胞的疗法的新型途径、组合物和方法。

4、在一些实施方案中，本文提供了一种工程化细胞，其相对于野生型细胞或对照细胞包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达，工程化细胞还包含一组外源多核苷酸，所述一组外源多核苷酸包含编码cd47的第一外源多核苷酸和编码嵌合抗原受体(car)的第二外源多核苷酸，其中第一和/或第二外源多核苷酸插入到细胞的至少一个等位基因的特定基因座中。

5、在一些实施方案中，特定基因座选自由以下组成的组：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。在许多实施方案中，将编码cd47的第一外源多核苷酸插入到选自由以下组成的组的特定基因座中：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。在一些实施方案中，将编码car的第二外源多核苷酸插入到选自由以下组成的组的特定基因座中：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。

6、在一些实施方案中，将编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸插入到不同的基因座中。在许多实施方案中，将编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸插入到相同的基因座中。在若干实施方案中，将编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸插入到b2m基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸插入到ciita基因座中。在许多实施方案中，将编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸插入到trac基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸插入到trb基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸插入到安全港或靶标基因座中。在一些实施方案中，安全港或靶标基因座选自由以下组成的组：ccr5基因座、cxcr4基因座、ppp1r12c(也称为aavs1)基因座、白蛋白基因座、shs231基因座、clybl基因座、rosa基因座(例如，rosa26基因座)、f3基因座(也称为cd142)、mica基因座、micb基因座、lrp1基因座(也称为cd91基因座)、hmgb1基因座、abo基因座、rhd基因座、fut1基因座和kdm5d基因座。在各种实施方案中，安全港或靶标基因座选自由以下组成的组：aavs1基因座、ccr5基因座和rosa26基因座。

7、在一些实施方案中，car选自由cd19特异性car、cd22特异性car和cd20特异性car组成的组。在一些实施方案中，car是双特异性car。在一些实施方案中，car是cd19特异性car。在一些实施方案中，car是cd22特异性car。在一些实施方案中，car是cd20特异性car。在一些实施方案中，car是双特异性car。在一些实施方案中，car是cd19/cd20双特异性car。在一些实施方案中，car是cd19/cd22双特异性car。

8、在许多实施方案中，工程化细胞不表达hla-a、hla-b和/或hla-c抗原。在一些实施方案中，工程化细胞不表达b2m。在其他实施方案中，工程化细胞不表达hla-dp、hla-dq和/或hla-dr抗原。在一些实施方案中，工程化细胞不表达ciita。在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞不表达tcr-α和/或tcr-β。

9、在许多实施方案中，工程化细胞是多能干细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是诱导性多能干细胞。

10、在一些实施方案中，工程化细胞是来源于诱导性多能干细胞的分化细胞。在各种实施方案中，分化细胞选自由nk细胞和t细胞组成的组。

11、在一些实施方案中，工程化细胞是来源于原代t细胞的细胞。在许多实施方案中，来源于原代t细胞的细胞来源于t细胞库，所述t细胞库包含来自不同于受体受试者的一个或多个供体受试者的原代t细胞。

12、在一些实施方案中，工程化细胞是来源于原代nk细胞的细胞。在许多实施方案中，来源于原代nk细胞的细胞来源于nk细胞库，所述nk细胞库包含来自不同于受体受试者的一个或多个供体受试者的原代nk细胞。

13、在一些实施方案中，工程化细胞保留多能性且/或保留分化潜能。

14、在许多实施方案中，在转移到第一受试者体内后，工程化细胞表现出选自由以下组成的组的一种或多种反应：(a)t细胞反应，(b)nk细胞反应，和(c)巨噬细胞反应，所述反应与转移到第二受试者体内后的野生型细胞相比有所降低。在一些情况下，第一受试者和第二受试者是不同的受试者。在一些情况下，巨噬细胞反应是吞噬。在各种实施方案中，与转移到受试者体内后的野生型细胞相比，工程化细胞在转移到受试者体内后表现出选自由以下组成的组的一项或多项：(a)受试者的th1活化减少，(b)受试者的nk细胞杀伤减少，和(c)受试者的完整pbmc的杀伤减少。在许多实施方案中，与转移到受试者体内后的野生型细胞相比，工程化细胞在转移到受试者体内后引发选自由以下组成的组的一项或多项：(a)受试者的供体特异性抗体减少，(b)受试者的igm或igg抗体减少，和(c)受试者的补体依赖性细胞毒性(cdc)减少。

15、在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到trac基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到trac基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到trb基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失细胞。在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到trb基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失细胞。在多个实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到b2m基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到b2m基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失细胞。在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到ciita基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到ciita基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失细胞。

16、在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到trac基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到trac基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到trb基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到trb基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在多个实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到b2m基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到b2m基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到ciita基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是包含插入到ciita基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。

17、在一些实施方案中，工程化细胞是包含插入到trac基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞是包含插入到trac基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞是包含插入到trb基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是包含插入到trb基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在多个实施方案中，工程化细胞是包含插入到b2m基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞是包含插入到b2m基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是包含插入到ciita基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和/或编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在许多实施方案中，工程化细胞是包含插入到ciita基因座中的编码cd47的第一外源多核苷酸和编码car的第二外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。

18、在一些实施方案中，提供了一种工程化细胞，其相对于野生型细胞或对照细胞包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达。

19、在一些实施方案中，工程化细胞不表达hla-a、hla-b和/或hla-c抗原。在许多实施方案中，工程化细胞不表达ciita。

20、在许多实施方案中，工程化细胞不表达hla-dp、hla-dq和/或hla-dr抗原。在一些实施方案中，工程化细胞不表达b2m。

21、在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞不表达tcr-α。在许多实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞不表达tcr-β。

22、在各种实施方案中，工程化细胞相对于野生型细胞或对照细胞过表达cd47。

23、在一些实施方案中，工程化细胞是多能干细胞。在许多实施方案中，工程化细胞是诱导性多能干细胞。

24、在许多实施方案中，工程化细胞是来源于诱导性多能干细胞的分化细胞。在一些实施方案中，分化细胞选自由nk细胞和t细胞组成的组。

25、在许多实施方案中，工程化细胞是来源于原代t细胞的细胞。在若干实施方案中，来源于原代t细胞的细胞来源于t细胞库，所述t细胞库包含来自不同于受体受试者的一个或多个供体受试者的原代t细胞。

26、在各种实施方案中，工程化细胞保留多能性且/或保留分化潜能。

27、在一些实施方案中，在转移到受试者体内后，工程化细胞引发选自由以下组成的组的一种或多种反应：(a)t细胞反应，(b)nk细胞反应，和(c)巨噬细胞反应，所述反应与转移到第二受试者体内后的野生型细胞相比有所降低。在一些情况下，第一受试者和第二受试者是不同的受试者。在一些情况下，巨噬细胞反应是吞噬。

28、在各种实施方案中，与转移到受试者体内后的野生型细胞相比，工程化细胞在转移到受试者体内后表现出选自由以下组成的组的一项或多项：(a)受试者的th1活化减少，(b)受试者的nk细胞杀伤减少，和(c)受试者的完整pbmc的杀伤减少。在许多实施方案中，与转移到受试者体内后的野生型细胞相比，工程化细胞在转移到受试者体内后引发选自由以下组成的组的一项或多项：(a)受试者的供体特异性抗体减少，(b)受试者的igm或igg抗体减少，和(c)受试者的补体依赖性细胞毒性(cdc)减少。

29、在一些实施方案中，工程化细胞是b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在一些情况下，工程化细胞是b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失原代t细胞。在一些情况下，工程化细胞是从低免疫原性诱导性多能干细胞分化的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失t细胞。在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。在一些情况下，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失原代t细胞。在一些实施方案中，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trb插入缺失/插入缺失细胞。在一些情况下，工程化细胞选自由以下组成的组：多能干细胞、诱导性多能干细胞、从诱导性多能干细胞分化的t细胞、原代t细胞和来源于原代t细胞的细胞，并且工程化细胞是b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trb插入缺失/插入缺失原代t细胞。在一些情况下，工程化细胞是从低免疫原性诱导性多能干细胞分化的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trac插入缺失/插入缺失t细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失细胞。在一些情况下，工程化细胞是b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失原代t细胞。在一些情况下，工程化细胞是从低免疫原性诱导性多能干细胞分化的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失和/或trb插入缺失/插入缺失t细胞。

30、在一些实施方案中，工程化细胞是低免疫原性细胞。

31、在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化细胞群和药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂。

32、在一些实施方案中，药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂包括选自由以下组成的组的一种或多种：plasma-lyte 右旋糖、葡聚糖、氯化钠、人血清白蛋白(hsa)、二甲基亚砜(dmso)及其组合。在一些实施方案中，药物组合物还包含药学上可接受的缓冲剂。在一些实施方案中，药学上可接受的缓冲剂是中性缓冲盐水或磷酸盐缓冲盐水。

33、在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化细胞群、浓度为约70-80％重量/重量的csb的基础溶液，以及以下中的一种或多种：约20-30％重量/重量的plasmalyte-atm、约0.3-5.3％重量/体积的人血清白蛋白(hsa)、约0-20％体积/体积的二甲基亚砜(dmso)和约100-400mm海藻糖。

34、在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化细胞群、浓度为约20-30％重量/重量的plasmalyte-atm的基础溶液，以及以下中的一种或多种：约70-80％重量/重量的csb、约0.3-5.3％重量/体积的人血清白蛋白(hsa)、约0-20％体积/体积的二甲基亚砜(dmso)和约100-400mm海藻糖。

35、在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化细胞群、约0.3-5.3％重量/体积的人血清白蛋白(hsa)，以及以下中的一种或多种：约70-80％重量/重量的csb、约20-30％重量/重量的plasmalyte-atm、约0-20％体积/体积的二甲基亚砜(dmso)和约100-400mm海藻糖。

36、在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化细胞群、约0-20％体积/体积的二甲基亚砜(dmso)，以及以下中的一种或多种：约70-80％重量/重量的csb、约20-30％重量/重量的plasmalyte-atm、约0.3-5.3％重量/体积的人血清白蛋白(hsa)和约100-400mm海藻糖。

37、在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化细胞群、约100-400mm海藻糖，以及以下中的一种或多种：约70-80％重量/重量的csb、约20-30％重量/重量的plasmalyte-atm、约0.3-5.3％重量/体积的人血清白蛋白(hsa)和约0-20％体积/体积的二甲基亚砜(dmso)。

38、在一些实施方案中，药物组合物包含约75％重量/重量的csb。在一些实施方案中，药物组合物包含约25％重量/重量的plasmalyte-atm。在一些实施方案中，药物组合物包含约0.3％重量/体积的hsa。在一些实施方案中，药物组合物包含约7.5％体积/体积的dmso。

39、在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含本文所述的任何工程化细胞群、浓度为约75％重量/重量的csb的基础溶液、约25％重量/重量的plasmalyte-atm、约0.3％重量/体积的人血清白蛋白(hsa)和约7.5％体积/体积的二甲基亚砜(dmso)。

40、在一些实施方案中，工程化细胞群为至多约8.0x108个细胞。在许多实施方案中，工程化细胞群为至多约6.0x108个细胞。在其他实施方案中，工程化细胞群为约1.0x106至约2.5x108个细胞。在一些实施方案中，工程化细胞群为约2.0x106至约2.0x108个细胞。

41、在各种实施方案中，工程化细胞群的范围为约5ml至约80ml。在许多实施方案中，工程化细胞群的范围为约10ml至约70ml。在一些实施方案中，工程化细胞群的范围为约10ml至约50ml。

42、在一些实施方案中，组合物被配制用于以单剂量施用。在许多实施方案中，组合物被配制用于以至多三个剂量施用。

43、在一些实施方案中，组合物被配制用于向受试者施用单剂量，所述施用需要约60分钟或更短的持续时间。在许多实施方案中，组合物被配制用于向受试者施用单剂量，所述施用需要约30分钟或更短的持续时间。

44、在一些实施方案中，药物组合物的工程化细胞群或其后代在施用后10天后在受试者中表现出至少40％的存活率。在各种实施方案中，药物组合物的工程化细胞群或其后代在施用后约2周后在受试者中表现出至少80％的存活率。在若干实施方案中，药物组合物的工程化细胞群或其后代在施用后约3周后在受试者中表现出至少100％的存活率。在许多实施方案中，药物组合物的工程化细胞群或其后代在施用后约4周后在受试者中表现出至少150％的存活率。

45、在另一个实施方案中，提供了一种用于治疗受试者的疾病或病症的剂量方案，其包括施用药物组合物，所述药物组合物包含本文所述的任何工程化细胞群和药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂，其中所述药物组合物以约1-3个剂量施用。

46、在一些实施方案中，以约1-3个剂量施用的药物组合物为至多约6.0x108个细胞。在一些实施方案中，以约1-3个剂量施用的药物组合物为约0.6x106至约6.0x108个细胞。在一些实施方案中，如果受试者的体重为50kg或更小，则以约1-3个剂量施用的药物组合物为约0.2x106至约5.0x106细胞/kg受试者体重。在一些实施方案中，如果受试者的体重大于50kg，则以约1-3个剂量施用的药物组合物为约0.1x108至约2.5x108个细胞。在一些实施方案中，以约1-3个剂量施用的药物组合物为约2.0x106细胞/kg受试者体重且至多为约2.x108个细胞。

47、在一些实施方案中，向受试者施用单剂量需要约60分钟或更短的持续时间。在一些实施方案中，向受试者施用单剂量需要约30分钟或更短的持续时间。

48、在一些实施方案中，药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂包括选自由以下组成的组的一种或多种：plasma-lyte 右旋糖、葡聚糖、氯化钠、人血清白蛋白(hsa)、二甲基亚砜(dmso)及其组合。

49、在一些实施方案中，药物组合物还包含药学上可接受的缓冲剂。在一些实施方案中，药学上可接受的缓冲剂是中性缓冲盐水或磷酸盐缓冲盐水。

50、在一些实施方案中，在施用药物组合物后，细胞群或其后代在受试者中存在至多9个月。在一些实施方案中，在施用药物组合物后，细胞群或其后代在受试者中存在至少两年或更久。

51、在一些实施方案中，在施用药物组合物后，工程化细胞群或其后代在施用后约10天后在受试者中表现出至少40％的存活率。在一些实施方案中，在施用药物组合物后，工程化细胞群或其后代在施用后约2周后在受试者中表现出至少80％的存活率。在一些实施方案中，在施用药物组合物后，工程化细胞群或其后代在施用后约3周后在受试者中表现出至少100％的存活率。在一些实施方案中，在施用药物组合物后，工程化细胞群或其后代在施用后约4周后在受试者中表现出至少150％的存活率。

52、在一些实施方案中，向受试者施用2-3个剂量，使得每个剂量的施用间隔的范围为1至24小时。在一些实施方案中，向受试者施用2-3个剂量，使得每个剂量的施用间隔的范围为1至28天。在一些实施方案中，向受试者施用2-3个剂量，使得每个剂量的施用间隔的范围为1至6周。在一些实施方案中，向受试者施用2-3个剂量，使得每个剂量的施用间隔的范围为1至12个月或更久。

53、本文提供了一种用于治疗受试者的疾病或病症的剂量方案，其包括施用药物组合物，所述药物组合物包含(i)工程化细胞，其包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达，所述工程化细胞还包含一组编码cd47和嵌合抗原受体(car)的外源多核苷酸。在一些实施方案中，使用病毒转导(例如使用载体)将外源多核苷酸组插入到t细胞的至少一个等位基因中。在一些实施方案中，载体是携带外源多核苷酸组的假型化、自失活慢病毒载体。在一些实施方案中，载体是用水疱性口炎病毒糖蛋白(vsv-g)包膜假型化的自失活慢病毒载体，并携带外源多核苷酸组。在一些实施方案中，使用基于慢病毒的病毒载体将外源多核苷酸组插入到t细胞的至少一个等位基因中。在一些实施方案中，将外源多核苷酸组插入到细胞的至少一个等位基因的安全港或靶标基因座中；和(ii)药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂，其中药物组合物包含至多约6.0x108个细胞。

54、本文提供了一种用于治疗受试者的疾病或病症的剂量方案，其包括施用药物组合物，所述药物组合物包含(i)工程化细胞，其包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达，所述工程化细胞还包含一组编码cd47和嵌合抗原受体(car)的外源多核苷酸。在一些实施方案中，使用病毒转导将外源多核苷酸组插入到t细胞的至少一个等位基因中。在一些实施方案中，使用基于慢病毒的病毒载体将外源多核苷酸组插入到t细胞的至少一个等位基因中。在一些实施方案中，将外源多核苷酸组插入到细胞的至少一个等位基因的安全港或靶标基因座中；和(ii)药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂，其中药物组合物以1-3个剂量施用。

55、本文提供了一种用于治疗受试者的疾病或病症的剂量方案，其包括施用药物组合物，所述药物组合物包含(i)工程化细胞，其包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达，所述工程化细胞还包含一组编码cd47和嵌合抗原受体(car)的外源多核苷酸，其中将外源多核苷酸组插入到细胞的至少一个等位基因的安全港或靶标基因座中；和(ii)药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂，其中一剂药物组合物施用约60分钟或更短的持续时间。

56、本文提供了一种用于治疗受试者的疾病或病症的剂量方案，其包括施用药物组合物，所述药物组合物包含(i)工程化细胞，其包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达；和(ii)药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂，其中药物组合物包含至多约6.0x108个细胞。

57、本文提供了一种用于治疗受试者的疾病或病症的剂量方案，其包括施用药物组合物，所述药物组合物包含(i)工程化细胞，其包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达；和(ii)药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂，其中药物组合物以1-3个剂量施用。

58、本文提供了一种用于治疗受试者的疾病或病症的剂量方案，其包括施用药物组合物，所述药物组合物包含(i)工程化细胞，其包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达；和(ii)药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂，其中一剂药物组合物施用60分钟或更短的持续时间。

59、在一些实施方案中，提供了一种治疗受试者的自身免疫性疾病/病症和/或炎性疾病/病症的方法，其包括向受试者施用本文所述的任何工程化细胞或本文所述的任何药物组合物或本文所述的任何剂量方案。在一些实施方案中，自身免疫性疾病/病症和/或炎性疾病/病症至少部分是b细胞和/或浆细胞介导的自身免疫性疾病/病症和/或炎性疾病/病症。在一些实施方案中，自身免疫性疾病/病症和/或炎性疾病/病症是b细胞和/或浆细胞介导的自身免疫性疾病/病症和/或炎性疾病/病症。在一些实施方案中，b细胞和/或浆细胞表达cd19、cd20或其组合。在一些实施方案中，自身免疫性疾病包括但不限于桥本甲状腺炎(hashimoto's thyroiditis)、系统性红斑狼疮、干燥综合征(sjogren's syndrome)、格雷夫斯病(graves'disease)、硬皮病、类风湿性关节炎、多发性硬化症、重症肌无力和糖尿病。“自身免疫性疾病”或“自身免疫性病症”或“炎性疾病”或“炎性病症”的更多实例可以在下文第z部分中找到。

60、在一些实施方案中，提供了一种在受试者中预防t细胞耗竭的方法，其包括向受试者施用本文所述的任何工程化细胞，其中car是cd19/cd20双特异性car。在一些实施方案中，提供了一种在受试者中预防t细胞耗竭的方法，其包括向受试者施用本文所述的任何工程化细胞，其中car是cd19/cd22双特异性car。

61、在一些实施方案中，本文提供了一种在受试者中预防t细胞耗竭或治疗疾病的方法，其包括：(i)在第一时间点，向受试者施用包含第一群体的本文所述的任何工程化细胞的第一剂量方案；和(ii)在第二时间点，向受试者施用包含第二群体的本文所述的任何工程化细胞的第二剂量方案，其中第一剂量方案和第二剂量方案不同。

62、在一些实施方案中，本文提供了一种在受试者中预防t细胞耗竭或治疗疾病的方法，其包括：(i)在第一时间点，向受试者施用包含第一群体的本文所述的任何工程化细胞的第一剂量方案；和(ii)在第二时间点，向受试者施用包含第二群体的本文所述的任何工程化细胞的第二剂量方案，其中第一群体的工程化细胞和第二群体的工程化细胞包含相同的嵌合抗原受体。

63、在一些实施方案中，本文提供了一种在受试者中预防t细胞耗竭或治疗疾病的方法，其包括：(i)在第一时间点，向受试者施用包含第一群体的本文所述的任何工程化细胞的第一剂量方案；和(ii)在第二时间点，向受试者施用包含第二群体的本文所述的任何工程化细胞的第二剂量方案，其中第一群体的工程化细胞和第二群体的工程化细胞包含不同的嵌合抗原受体。

64、在一些实施方案中，本文提供了一种在受试者中预防t细胞耗竭或治疗疾病的方法，其包括：(i)在第一时间点，向受试者施用包含第一群体的本文所述的任何工程化细胞的第一剂量方案；和(ii)在第二时间点，向受试者施用包含第二群体的本文所述的任何工程化细胞的第二剂量方案，其中第一群体的工程化细胞包含结合第一抗原的第一嵌合抗原受体，并且第二群体的工程化细胞包含结合第二抗原的第二嵌合抗原受体，并且其中第一抗原和第二抗原相同。

65、在一些实施方案中，本文提供了一种在受试者中预防t细胞耗竭或治疗疾病的方法，其包括：(i)在第一时间点，向受试者施用包含第一群体的本文所述的任何工程化细胞的第一剂量方案；和(ii)在第二时间点，向受试者施用包含第二群体的本文所述的任何工程化细胞的第二剂量方案，其中第一群体的工程化细胞包含结合第一抗原的第一嵌合抗原受体，并且第二群体的工程化细胞包含结合第二抗原的第二嵌合抗原受体，并且其中第一抗原和第二抗原不同。

66、本文提供了非活化t细胞，其包含相对于野生型t细胞降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达，以及编码嵌合抗原受体(car)的第一外源多核苷酸。

67、在一些实施方案中，非活化t细胞是原代t细胞。在其他实施方案中，非活化t细胞从本技术的工程化细胞分化。

68、在一些实施方案中，t细胞是cd8+t细胞。

69、在一些实施方案中，非活化t细胞未用抗cd3抗体、抗cd28抗体、t细胞活化细胞因子或可溶性t细胞共刺激分子处理。

70、在一些实施方案中，抗cd3抗体是okt3。在一些实施方案中，抗cd28抗体是cd28.2。在一些实施方案中，t细胞活化细胞因子选自由il-2、il-7、il-15和il-21组成的t细胞活化细胞因子组。在一些实施方案中，可溶性t细胞共刺激分子选自由抗cd28抗体、抗cd80抗体、抗cd86抗体、抗cd137l抗体和抗icos-l抗体组成的可溶性t细胞共刺激分子组。

71、在一些实施方案中，非活化t细胞不表达活化标志物。

72、在一些实施方案中，非活化t细胞表达cd3和cd28，并且其中cd3和/或cd28是无活性的。

73、在一些实施方案中，第一外源多核苷酸由包含cd8结合剂的慢病毒载体携带。

74、在一些实施方案中，非活化t细胞还包含编码cd47的第二外源多核苷酸。

75、在一些实施方案中，将第一和/或第二外源多核苷酸插入到t细胞的至少一个等位基因的特定基因座中。在一些实施方案中，使用病毒转导将第一和/或第二外源多核苷酸插入到t细胞的至少一个等位基因中。在一些实施方案中，使用基于慢病毒的病毒载体将第一和/或第二外源多核苷酸插入到t细胞的至少一个等位基因中。在一些实施方案中，载体是携带第一和/或第二外源多核苷酸的假型化、自失活慢病毒载体。在一些实施方案中，载体是用水疱性口炎病毒糖蛋白(vsv-g)包膜假型化的自失活慢病毒载体，并携带第一和/或第二外源多核苷酸。在一些实施方案中，特定基因座选自由以下组成的组：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸插入到选自由以下组成的组的特定基因座中：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。在一些实施方案中，将编码car的第一外源多核苷酸插入到选自由以下组成的组的特定基因座中：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到不同的基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到相同的基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到b2m基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到ciita基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到trac基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到trb基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到安全港或靶标基因座中。在一些实施方案中，安全港或靶标基因座选自由以下组成的组：ccr5基因座、cxcr4基因座、ppp1r12c(也称为aavs1)基因座、白蛋白基因座、shs231基因座、clybl基因座、rosa基因座(例如，rosa26基因座)、f3基因座(也称为cd142)、mica基因座、micb基因座、lrp1基因座(也称为cd91基因座)、hmgb1基因座、abo基因座、rhd基因座、fut1基因座和kdm5d基因座。在一些实施方案中，安全港或靶标基因座选自由以下组成的组：aavs1基因座、ccr5基因座和rosa26基因座。

76、在一些实施方案中，car选自由cd19特异性car、cd22特异性car和cd20特异性car组成的组。在一些实施方案中，car是双特异性car。在一些实施方案中，双特异性car是cd19/cd20双特异性car。在一些实施方案中，双特异性car是cd19/cd22双特异性car。

77、在一些实施方案中，非活化t细胞不表达hla-a、hla-b和/或hla-c抗原。在一些实施方案中，非活化t细胞不表达b2m。在一些实施方案中，非活化t细胞不表达hla-dp、hla-dq和/或hla-dr抗原。在一些实施方案中，非活化t细胞不表达ciita。在一些实施方案中，非活化t细胞不表达tcr-α和tcr-β。

78、在一些实施方案中，非活化t细胞是包含插入到trac基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和/或编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

79、在一些实施方案中，非活化t细胞是包含插入到trac基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

80、在一些实施方案中，非活化t细胞是包含插入到trb基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和/或编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

81、在一些实施方案中，非活化t细胞是包含插入到trb基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

82、在一些实施方案中，非活化t细胞是包含插入到b2m基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和/或编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

83、在一些实施方案中，非活化t细胞是包含插入到b2m基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

84、在一些实施方案中，非活化t细胞是包含插入到ciita基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和/或编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

85、在一些实施方案中，非活化t细胞是包含插入到ciita基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

86、本文提供了工程化t细胞，其相对于野生型t细胞包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达，其中工程化t细胞还包含由慢病毒载体携带的编码嵌合抗原受体(car)的第一外源多核苷酸。本文提供了工程化t细胞，其相对于野生型t细胞包含降低的hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dq、hla-dr、b2m、ciita、tcr-α和/或tcr-β的表达，其中工程化t细胞还包含由包含cd8结合剂的慢病毒载体携带的编码嵌合抗原受体(car)的第一外源多核苷酸。

87、在一些实施方案中，工程化t细胞是原代t细胞。在其他实施方案中，工程化t细胞从本技术的工程化细胞分化。在一些实施方案中，t细胞是cd8+t细胞。

88、在一些实施方案中，工程化t细胞未用抗cd3抗体、抗cd28抗体、t细胞活化细胞因子或可溶性t细胞共刺激分子处理。在一些实施方案中，抗cd3抗体是okt3，其中抗cd28抗体是cd28.2，其中t细胞活化细胞因子选自由il-2、il-7、il-15和il-21组成的t细胞活化细胞因子组，并且其中可溶性t细胞共刺激分子选自由抗cd28抗体、抗cd80抗体、抗cd86抗体、抗cd137l抗体和抗icos-l抗体组成的可溶性t细胞共刺激分子组。

89、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达活化标志物。在一些实施方案中，工程化t细胞表达cd3和cd28，并且其中cd3和/或cd28是无活性的。

90、在一些实施方案中，工程化t细胞还包含编码cd47的第二外源多核苷酸。在一些实施方案中，将第一和/或第二外源多核苷酸插入到t细胞的至少一个等位基因的特定基因座中。在一些实施方案中，特定基因座选自由以下组成的组：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸插入到选自由以下组成的组的特定基因座中：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。在一些实施方案中，将编码car的第一外源多核苷酸插入到选自由以下组成的组的特定基因座中：安全港或靶标基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到不同的基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到相同的基因座中。在一些实施方案中，将编码cd47的第二外源多核苷酸和编码car的第一外源多核苷酸插入到b2m基因座、ciita基因座、trac基因座、trb基因座或安全港或靶标基因座中。在一些实施方案中，安全港或靶标基因座选自由以下组成的组：ccr5基因座、cxcr4基因座、ppp1r12c(也称为aavs1)基因座、白蛋白基因座、shs231基因座、clybl基因座、rosa基因座(例如，rosa26基因座)、f3基因座(也称为cd142)、mica基因座、micb基因座、lrp1基因座(也称为cd91基因座)、hmgb1基因座、abo基因座、rhd基因座、fut1基因座和kdm5d基因座。在一些实施方案中，安全港或靶标基因座选自由以下组成的组：aavs1基因座、ccr5基因座和rosa26基因座。

91、在一些实施方案中，car选自由cd19特异性car、cd22特异性car和cd20特异性car组成的组。

92、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达hla-a、hla-b和/或hla-c抗原，其中工程化t细胞不表达b2m，其中工程化t细胞不表达hla-dp、hla-dq和/或hla-dr抗原，其中工程化t细胞不表达ciita，和/或其中工程化t细胞不表达tcr-α和tcr-β。

93、在一些实施方案中，工程化t细胞是包含插入到trac基因座、trb基因座、b2m基因座或ciita基因座中的编码cd47的第二外源多核苷酸和/或编码car的第一外源多核苷酸的b2m插入缺失/插入缺失、ciita插入缺失/插入缺失、trac插入缺失/插入缺失细胞。

94、在一些实施方案中，本技术的非活化t细胞和/或工程化t细胞在受试者中。在一些实施方案中，本技术的非活化t细胞和/或工程化t细胞在体外。

95、在一些实施方案中，本技术的非活化t细胞和/或工程化t细胞表达cd8结合剂。在一些实施方案中，cd8结合剂是抗cd8抗体。在一些实施方案中，抗cd8抗体选自由以下组成的组：小鼠抗cd8抗体、兔抗cd8抗体、人抗cd8抗体、人源化抗cd8抗体、骆驼科动物(例如美洲驼、羊驼、骆驼)抗cd8抗体及其片段。在一些实施方案中，其片段是scfv或vhh。在一些实施方案中，cd8结合剂结合cd8α链和/或cd8β链。

96、在一些实施方案中，cd8结合剂融合至掺入病毒包膜中的跨膜结构域。在一些实施方案中，慢病毒载体用病毒融合蛋白假型化。在一些实施方案中，病毒融合蛋白包含一种或多种修饰以降低与其天然受体的结合。

97、在一些实施方案中，病毒融合蛋白融合至cd8结合剂。在一些实施方案中，病毒融合蛋白包含融合至cd8结合剂的尼帕病毒f糖蛋白和尼帕病毒g糖蛋白。在一些实施方案中，慢病毒载体不包含t细胞活化分子或t细胞共刺激分子。在一些实施方案中，慢病毒载体编码第一外源多核苷酸和/或第二外源多核苷酸。

98、在一些实施方案中，在转移到第一受试者体内后，非活化t细胞或工程化t细胞表现出选自由以下组成的组的一种或多种反应：(a)t细胞反应，(b)nk细胞反应，和(c)巨噬细胞反应，所述反应与转移到第二受试者体内后的野生型细胞相比有所降低。在一些实施方案中，第一受试者和第二受试者是不同的受试者。在一些实施方案中，巨噬细胞反应是吞噬。

99、在一些实施方案中，与转移到受试者体内后的野生型细胞相比，非活化t细胞或工程化t细胞在转移到受试者体内后表现出选自由以下组成的组的一项或多项：(a)受试者的th1活化减少，(b)受试者的nk细胞杀伤减少，和(c)受试者的完整pbmc的杀伤减少。

100、在一些实施方案中，与转移到受试者体内后的野生型细胞相比，非活化t细胞或工程化t细胞在转移到受试者体内后引发选自由以下组成的组的一项或多项：(a)受试者的供体特异性抗体减少，(b)受试者的igm或igg抗体减少，和(c)受试者的补体依赖性细胞毒性(cdc)减少。

101、在一些实施方案中，在受试者体内用包含cd8结合剂的慢病毒载体转导非活化t细胞或工程化t细胞。在一些实施方案中，慢病毒载体携带编码car和/或cd47的基因。

102、本文提供了药物组合物，其包含本技术的非活化t细胞和/或工程化t细胞群和药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂。

103、本文提供了方法，其包括向受试者施用包含本技术的非活化t细胞和/或工程化t细胞群的组合物，或一种或多种本技术的药物组合物。

104、在一些实施方案中，在施用组合物之前、之后和/或同时不向受试者施用t细胞活化治疗。在一些实施方案中，t细胞活化治疗包括淋巴细胞清除。

105、本文提供了治疗罹患自身免疫性疾病/病症和/或炎性疾病/病症的受试者的方法，其包括向受试者施用包含本技术的非活化t细胞和/或工程化t细胞群的组合物，或一种或多种本技术的药物组合物，其中在施用组合物之前、之后和/或同时不向受试者施用t细胞活化治疗。在一些实施方案中，t细胞活化治疗包括淋巴细胞清除。

106、本文提供了用于在有需要的受试者体内扩增能够识别并杀伤所述受试者的肿瘤细胞的t细胞的方法，其包括向受试者施用包含本技术的非活化t细胞和/或工程化t细胞群的组合物，或一种或多种本技术的药物组合物，其中在施用组合物之前、之后和/或同时不向受试者施用t细胞活化治疗。在一些实施方案中，t细胞活化治疗包括淋巴细胞清除。

107、本文提供了用于治疗受试者的疾病或病症的剂量方案，其包括施用包含本技术的非活化t细胞和/或工程化t细胞群的药物组合物，或一种或多种本技术的药物组合物，以及药学上可接受的添加剂、载剂、稀释剂或赋形剂，其中药物组合物以约1-3个剂量施用。

108、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

109、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car和具有seq id no:45的cdr序列的cd22car，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

110、在一些实施方案中，编码的cd19 car具有seq id no:117中列出的对应氨基酸序列或与seq id no:117中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)，具有以下组分：cd8α信号肽、fmc63 scfv(vl-whitlow接头-vh)、cd8α铰链结构域、cd8α跨膜结构域、4-1bb共刺激结构域和cd3ζ信号传导结构域。

111、在一些实施方案中，编码的cd22 car具有seq id no:45中列出的对应氨基酸序列或与seq id no:45中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)。

112、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含编码一种或多种嵌合抗原受体(car)的外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq idno:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

113、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种主要组织相容性复合物(mhc)i类和/或ii类人白细胞抗原分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

114、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seqid no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

115、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

116、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

117、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seqid no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

118、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的方法，其包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种主要组织相容性复合物(mhc)i类和/或ii类人白细胞抗原分子的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

119、在一些实施方案中，car具有seq id no:19、29和37中任一个的scfv序列。

120、在一些实施方案中，car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列。

121、在一些实施方案中，工程化t细胞包含cd19特异性car和cd20特异性car。

122、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

123、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

124、在一些实施方案中，cd19 car t细胞和cd20 car t细胞同时施用。

125、在一些实施方案中，cd19 car+t细胞和cd20 car+t细胞按顺序施用。

126、在一些实施方案中，在施用cd20 car+t细胞之前施用cd19car+t细胞。

127、在一些实施方案中，在施用cd19 car+t细胞之前施用cd20car+t细胞。

128、在一些实施方案中，以治疗有效量的cd19和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独cd19 car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

129、在一些实施方案中，以治疗有效量的cd19和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独cd19 car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

130、在一些实施方案中，工程化t细胞从原代t细胞或其后代繁殖，或来源于从ipsc或其后代分化的t细胞。

131、在一些实施方案中，工程化t细胞是来源于诱导性多能干细胞或其后代的分化细胞。

132、在一些实施方案中，分化细胞是t细胞或自然杀伤(nk)细胞。

133、在一些实施方案中，工程化t细胞是原代免疫细胞的后代，任选地其中原代免疫细胞的后代是t细胞或nk细胞。

134、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的β-2-微球蛋白(b2m)和/或mhc ii类反式活化因子(ciita)的表达。

135、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达b2m和/或ciita。

136、在一些实施方案中，工程化t细胞包含降低的tcr-α和/或tcr-β的表达。

137、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达tcr-α和/或tcr-β。

138、在一些实施方案中，一种或多种致耐受因子选自由以下组成的组：cd47、cd24、cd27、cd35、cd46、cd55、cd59、cd200、hla-c、hla-e、hla-e重链、hla-g、pd-l1、ido1、ctla4-ig、c1抑制剂、il-10、il-35、fasl、ccl21、ccl22、mfge8、a20/tnfaip3、cd39、cr1、hla-f、il15-rf、manf和serpinb9。

139、在一些实施方案中，一种或多种致耐受因子包括cd47。

140、在一些实施方案中，cd19特异性car和一种或多种致耐受因子由单一双顺反子多核苷酸编码。

141、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd47由单一双顺反子多核苷酸编码。

142、在一些实施方案中，cd20特异性car和一种或多种致耐受因子由单一双顺反子多核苷酸编码。

143、在一些实施方案中，cd20特异性car和cd47由单一双顺反子多核苷酸编码。

144、在一些实施方案中，将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸中的一个或多个插入到细胞的至少一个等位基因的第一、第二和/或第三特定基因座中。

145、在一些实施方案中，第一、第二和/或第三特定基因座选自由以下组成的组：安全港基因座、靶标基因座、rhd基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。

146、在一些实施方案中，安全港基因座选自由以下组成的组：ccr5基因座、ppp1r12c基因座、clybl基因座和rosa基因座。

147、在一些实施方案中，靶标基因座选自由以下组成的组：cxcr4基因座、alb基因座、shs231基因座、f3(cd142)基因座、mica基因座、micb基因座、lrp1(cd91)基因座、hmgb1基因座、abo基因座、fut1基因座和kdm5d基因座。

148、在一些实施方案中，使用基因疗法载体或选自由转座酶、piggybac转座子、睡美人(sb11)转座子、mos1转座子和tol2转座子组成的组的转座酶系统将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

149、在一些实施方案中，基因疗法载体是逆转录病毒或融合体。

150、在一些实施方案中，使用crispr/cas基因编辑将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

151、在一些实施方案中，crispr/cas系统包含选自由cas9、cas12a和cas12b组成的组的cas效应蛋白。

152、在一些实施方案中，crispr/cas系统包含选自由以下组成的组的cas效应蛋白：任选地选自由cas3、cas8a、cas5、cas8b、cas8c、cas10d、cse1、cse2、csy1、csy2、csy3和gsu0054组成的组；任选地选自由cas9、csn2和cas4组成的组；任选地选自由cas10、csm2、cmr5、cas10、csx11和csx10组成的组；任选地csf1；任选地选自由cas12a、cas12b、cas12c、c2c4、c2c8、c2c5、c2c10、c2c9、casx(cas12e)和casy(cas12d)组成的组；以及任选地选自由cas13、cas13a、c2c2、cas13b、cas13c和cas13d组成的组。

153、在一些实施方案中，crispr/cas基因编辑从供体受试者离体进行。

154、在一些实施方案中，使用慢病毒载体将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

155、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于受体患者后逃避nk细胞介导的细胞毒性。

156、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于受体患者后受到保护而免于成熟nk细胞的细胞裂解。

157、在一些实施方案中，工程化t细胞逃避巨噬细胞介导的细胞毒性，任选地其中巨噬细胞介导的细胞毒性涉及吞噬作用和/或活性氧物质。

158、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于受体患者后不诱导对细胞的免疫反应。

159、在一些实施方案中，自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征和肺部病状组成的组。

160、在一些实施方案中，施用选自由静脉内注射、肌内注射、血管内注射和移植组成的组。

161、在一些实施方案中，在对患者开始不同的治疗方案之前、期间或之后施用工程化t细胞。

162、在一些实施方案中，不同的治疗方案选自由以下组成的组：重新给药相同或不同的细胞，以及预治疗、同时治疗或随后用附加剂治疗。

163、在一些实施方案中，不同的细胞是自体t或nk细胞或car-t细胞，其表达的第一car不同于工程化car-t细胞表达的第二car。

164、在一些实施方案中，患者在施用工程化t细胞之前用免疫耗竭疗法进行治疗。

165、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺。

166、在一些实施方案中，患者已经接受过先前的抗体疗法。

167、在一些实施方案中，抗体疗法是利妥昔单抗(rituximab)。

168、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约1-50mg/m2的氟达拉滨约1-7天。

169、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约1、约5、约10、约20、约30、约40或约50mg/m2的氟达拉滨约1、约2、约3、约4、约5、约6或约7天。

170、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约30mg/m2的氟达拉滨约4天。

171、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约100-1000mg/m2的环磷酰胺约1-7天。

172、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约100、约200、约300、约400、约500、约600、约700、约800、约900、约1000mg/m2的环磷酰胺约1、约2、约3、约4、约5、约6或约7天。

173、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约500mg/m2的环磷酰胺约2天。

174、在一些实施方案中，向患者施用至少约40x104个工程化t细胞。

175、在一些实施方案中，向患者施用至少约40x105个工程化t细胞。

176、在一些实施方案中，工程化t细胞在受试者体内持续存在至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或更长时间。

177、在一些实施方案中，工程化t细胞的治疗效果持续至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或更长的持续时间。

178、在一些实施方案中，野生型细胞或对照细胞是起始材料。

179、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

180、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car和具有seq id no:45的cdr序列的cd22car，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

181、在一些实施方案中，编码的cd19 car具有seq id no:117中列出的对应氨基酸序列或与seq id no:117中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)，具有以下组分：cd8α信号肽、fmc63 scfv(vl-whitlow接头-vh)、cd8α铰链结构域、cd8α跨膜结构域、4-1bb共刺激结构域和cd3ζ信号传导结构域。

182、在一些实施方案中，编码的cd22 car具有seq id no:45中列出的对应氨基酸序列或与seq id no:45中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)。

183、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含编码一种或多种嵌合抗原受体(car)的外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seqid no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

184、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种主要组织相容性复合物(mhc)i类和/或ii类人白细胞抗原分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

185、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

186、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

187、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq idno:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

188、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

189、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的受体患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种主要组织相容性复合物(mhc)i类和/或ii类人白细胞抗原分子的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

190、在一些实施方案中，car具有seq id no:19、29和37中任一个的scfv序列。

191、在一些实施方案中，car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列。

192、在一些实施方案中，工程化t细胞包含cd19特异性car和cd20特异性car。

193、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

194、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

195、在一些实施方案中，cd19 car t细胞和cd20 car t细胞同时施用。

196、在一些实施方案中，cd19 car+t细胞和cd20 car+t细胞按顺序施用。

197、在一些实施方案中，在施用cd20 car+t细胞之前施用cd19car+t细胞。

198、在一些实施方案中，在施用cd19 car+t细胞之前施用cd20car+t细胞。

199、在一些实施方案中，以治疗有效量的cd19和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独cd19 car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

200、在一些实施方案中，以治疗有效量的cd19和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独cd19 car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

201、在一些实施方案中，工程化t细胞从原代t细胞或其后代繁殖，或来源于从ipsc或其后代分化的t细胞。

202、在一些实施方案中，工程化t细胞是来源于诱导性多能干细胞或其后代的分化细胞。

203、在一些实施方案中，分化细胞是t细胞或自然杀伤(nk)细胞。

204、在一些实施方案中，工程化t细胞是原代免疫细胞的后代，任选地其中原代免疫细胞的后代是t细胞或nk细胞。

205、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的β-2-微球蛋白(b2m)和/或mhc ii类反式活化因子(ciita)的表达。

206、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达b2m和/或ciita。

207、在一些实施方案中，工程化t细胞包含降低的tcr-α和/或tcr-β的表达。

208、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达tcr-α和/或tcr-β。

209、在一些实施方案中，一种或多种致耐受因子选自由以下组成的组：cd47、cd24、cd27、cd35、cd46、cd55、cd59、cd200、hla-c、hla-e、hla-e重链、hla-g、pd-l1、ido1、ctla4-ig、c1抑制剂、il-10、il-35、fasl、ccl21、ccl22、mfge8、a20/tnfaip3、cd39、cr1、hla-f、il15-rf、manf和serpinb9。

210、在一些实施方案中，一种或多种致耐受因子包括cd47。

211、在一些实施方案中，cd19特异性car和一种或多种致耐受因子由单一双顺反子多核苷酸编码。

212、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd47由单一双顺反子多核苷酸编码。

213、在一些实施方案中，cd20特异性car和一种或多种致耐受因子由单一双顺反子多核苷酸编码。

214、在一些实施方案中，cd20特异性car和cd47由单一双顺反子多核苷酸编码。

215、在一些实施方案中，将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸中的一个或多个插入到细胞的至少一个等位基因的第一、第二和/或第三特定基因座中。

216、在一些实施方案中，第一、第二和/或第三特定基因座选自由以下组成的组：安全港基因座、靶标基因座、rhd基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。

217、在一些实施方案中，安全港基因座选自由以下组成的组：ccr5基因座、ppp1r12c基因座、clybl基因座和rosa基因座。

218、在一些实施方案中，靶标基因座选自由以下组成的组：cxcr4基因座、alb基因座、shs231基因座、f3(cd142)基因座、mica基因座、micb基因座、lrp1(cd91)基因座、hmgb1基因座、abo基因座、fut1基因座和kdm5d基因座。

219、在一些实施方案中，使用基因疗法载体或选自由转座酶、piggybac转座子、睡美人(sb11)转座子、mos1转座子和tol2转座子组成的组的转座酶系统将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

220、在一些实施方案中，使用crispr/cas基因编辑将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

221、在一些实施方案中，crispr/cas系统包含选自由cas9、cas12a和cas2b组成的组的cas效应蛋白。

222、在一些实施方案中，crispr/cas系统包含选自由以下组成的组的cas效应蛋白：任选地选自由cas3、cas8a、cas5、cas8b、cas8c、cas10d、cse1、cse2、csy1、csy2、csy3和gsu0054组成的组；任选地选自由cas9、csn2和cas4组成的组；任选地选自由cas10、csm2、cmr5、cas10、csx11和csx10组成的组；任选地csf1；任选地选自由cas12a、cas12b、cas12c、c2c4、c2c8、c2c5、c2c10、c2c9、casx(cas12e)和casy(cas12d)组成的组；以及任选地选自由cas13、cas13a、c2c2、cas13b、cas13c和cas13d组成的组。

223、在一些实施方案中，crispr/cas基因编辑从供体受试者离体进行。

224、在一些实施方案中，使用慢病毒载体将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

225、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于受体患者后逃避nk细胞介导的细胞毒性。

226、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于受体患者后受到保护而免于成熟nk细胞的细胞裂解。

227、在一些实施方案中，工程化t细胞逃避巨噬细胞介导的细胞毒性，任选地其中巨噬细胞介导的细胞毒性涉及吞噬作用和/或活性氧物质。

228、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于受体患者后不诱导对细胞的免疫反应。

229、在一些实施方案中，自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征和肺部病状组成的组。

230、在一些实施方案中，施用选自由静脉内注射、肌内注射、血管内注射和移植组成的组。

231、在一些实施方案中，在对患者开始不同的治疗方案之前、期间或之后施用工程化t细胞。

232、在一些实施方案中，不同的治疗方案选自由以下组成的组：重新给药相同或不同的细胞，以及预治疗、同时治疗或随后用附加剂治疗。

233、在一些实施方案中，不同的细胞是自体t或nk细胞或car-t细胞，其表达的第一car不同于工程化car-t细胞表达的第二car。

234、在一些实施方案中，患者在施用工程化t细胞之前用免疫耗竭疗法进行治疗。

235、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺。

236、在一些实施方案中，患者已经接受过先前的抗体疗法。

237、在一些实施方案中，抗体疗法是利妥昔单抗。

238、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约1-50mg/m2的氟达拉滨约1-7天。

239、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约1、约5、约10、约20、约30、约40或约50mg/m2的氟达拉滨约1、约2、约3、约4、约5、约6或约7天。

240、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约30mg/m2的氟达拉滨约4天。

241、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约100-1000mg/m2的环磷酰胺约1-7天。

242、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约100、约200、约300、约400、约500、约600、约700、约800、约900、约1000mg/m2的环磷酰胺约1、约2、约3、约4、约5、约6或约7天。

243、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约500mg/m2的环磷酰胺约2天。

244、在一些实施方案中，向患者施用至少约40x104个工程化t细胞。

245、在一些实施方案中，向患者施用至少约40x105个工程化t细胞。

246、在一些实施方案中，工程化t细胞在受试者体内持续存在至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或更长时间。

247、在一些实施方案中，工程化t细胞的治疗效果持续至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或更长的持续时间。

248、在一些实施方案中，野生型细胞或对照细胞是起始材料。

249、在一些实施方案中，未改变或未修饰的野生型或对照细胞是从供体分离的起始t细胞。

250、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗患有爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)感染的患者的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种主要组织相容性复合物(mhc)i类和/或ii类人白细胞抗原(hla)分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种嵌合抗原受体(car)的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

251、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗患有ebv感染的患者的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19或cd22具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

252、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

253、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的β-2-微球蛋白(b2m)的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

254、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和mhc ii类反式活化因子(ciita)的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

255、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

256、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

257、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

258、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的tcr-α(trac)和/或tcr-β(trb)的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

259、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

260、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

261、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

262、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

263、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

264、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括评估患者的ebv感染和任选地多发性硬化症和/或诊断患者患有ebv感染和任选地多发性硬化症，以及向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

265、在一些实施方案中，一种或多种car包含cd8α铰链结构域、cd28铰链结构域或igg4铰链结构域。

266、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:9的氨基酸序列的cd8α铰链结构域。

267、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:10或113的氨基酸序列的cd28铰链结构域。

268、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:11或12的氨基酸序列的igg4铰链结构域。

269、在一些实施方案中，一种或多种car包含cd8α跨膜结构域或cd28跨膜结构域。

270、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:14的氨基酸序列的cd8α跨膜结构域。

271、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:15或114的氨基酸序列的cd28跨膜结构域。

272、在一些实施方案中，一种或多种car包含4-1bb共刺激结构域、cd28共刺激结构域或cd3ζ信号传导结构域。

273、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:16的氨基酸序列的4-1bb共刺激结构域。

274、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:17的氨基酸序列的cd28共刺激结构域。

275、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:18或115的氨基酸序列的cd3ζ信号传导结构域。

276、在一些实施方案中，一种或多种car包含细胞外配体结合结构域，所述细胞外配体结合结构域包含seq id no:19、29、37、45、54、85、63、72或118中任一个的scfv序列，或其中car具有包含seq id no:129-132或135-172中任一个的重链和轻链序列的scfv序列。

277、在一些实施方案中，一种或多种car具有seq id no:32、34、36、117、91、92、92、128、133或134中任一个的序列。

278、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症并向患者施用工程化t细胞群的方法，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:37的cdr序列的cd20 car。

279、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:133或134的cdr序列和/或来自seq id no:129-132或135-172的vh/vl序列的cdr序列的ebv抗原car。

280、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car。

281、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:45的cdr序列的cd22 car。

282、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car和具有seq id no:45的cdr序列的cd22 car。

283、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含编码一种或多种car的外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36、117、91、92、92、128、133或134中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq idno:19、29、37、45、54、85、63、72或118中任一个的scfv序列，或其中car具有包含seq id no:129-132或135-172中任一个的重链和轻链序列的scfv序列。

284、在一些实施方案中，所述方法还包括在向患者施用工程化t细胞群之前评估患者的ebv感染和任选地多发性硬化症和/或诊断患者患有ebv感染和任选地多发性硬化症。

285、在一些实施方案中，诊断包括评估患者的ebv感染。

286、在一些实施方案中，诊断包括评估患者的多发性硬化症。

287、在一些实施方案中，所述治疗预防多发性硬化症。

288、在一些实施方案中，所述治疗治疗多发性硬化症。

289、在一些实施方案中，患有ebv感染的患者已被诊断患有多发性硬化症。

290、在一些实施方案中，多发性硬化症是复发缓解型多发性硬化症、原发进展型多发性硬化症或继发进展型多发性硬化症。

291、在一些实施方案中，患者在施用工程化t细胞后发生多发性硬化症的缓解。

292、在一些实施方案中，患有ebv感染的患者正在接受ebv感染的治疗。

293、在一些实施方案中，患有ebv感染的患者患有活动性ebv感染。

294、在一些实施方案中，患有ebv感染的患者患有非活动性ebv感染。

295、在一些实施方案中，患者在施用工程化t细胞后ebv感染减少，任选地其中ebv感染减少通过病毒载量减少来表征。

296、在一些实施方案中，治疗防止ebv感染从非活动性ebv感染转变为活动性ebv感染。

297、在一些实施方案中，所述方法导致b细胞耗竭。

298、在一些实施方案中，工程化t细胞包含cd19特异性car、cd20特异性car、cd22特异性car、bcma特异性car、gprc5d特异性car、cd38特异性car、cd70特异性car、cd79b特异性car和ebv抗原特异性car中的一种或多种。

299、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含编码一种或多种car的外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

300、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

301、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

302、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

303、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

304、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

305、在一些实施方案中，一种或多种car包含cd8α铰链结构域、cd28铰链结构域或igg4铰链结构域。

306、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:9的氨基酸序列的cd8α铰链结构域。

307、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:10或113的氨基酸序列的cd28铰链结构域。

308、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:11或12的氨基酸序列的igg4铰链结构域。

309、在一些实施方案中，一种或多种car包含cd8α跨膜结构域或cd28跨膜结构域。

310、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:14的氨基酸序列的cd8α跨膜结构域。

311、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:15或114的氨基酸序列的cd28跨膜结构域。

312、在一些实施方案中，一种或多种car包含4-1bb共刺激结构域、cd28共刺激结构域或cd3ζ信号传导结构域。

313、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:16的氨基酸序列的4-1bb共刺激结构域。

314、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:17的氨基酸序列的cd28共刺激结构域。

315、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:18或115的氨基酸序列的cd3ζ信号传导结构域。

316、在一些实施方案中，一种或多种car包含细胞外配体结合结构域，所述细胞外配体结合结构域包含seq id no:19、29、37、45、54、85、63、72或118中任一个的scfv序列，或其中car具有包含seq id no:129-132或135-172中任一个的重链和轻链序列的scfv序列。

317、在一些实施方案中，一种或多种car具有seq id no:32、34、36、117、91、92、92、128、133或134中任一个的序列。

318、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

319、在一些实施方案中，所述方法还包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病。

320、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car和具有seq id no:45的cdr序列的cd22 car，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

321、在一些实施方案中，编码的cd19 car具有seq id no:117中列出的对应氨基酸序列或与seq id no:117中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)，具有以下组分：cd8α信号肽、fmc63 scfv(vl-whitlow接头-vh)、cd8α铰链结构域、cd8α跨膜结构域、4-1bb共刺激结构域和cd3ζ信号传导结构域。

322、在一些实施方案中，编码的cd22 car具有seq id no:45中列出的对应氨基酸序列或与seq id no:45中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)。

323、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:133或134的cdr序列和/或来自seq id no:129-132或135-172的vh/vl序列的cdr序列的ebv抗原特异性car，并且其中自身免疫性疾病是多发性硬化症。

324、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含编码一种或多种car的外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq idno:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

325、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

326、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq idno:19、29或37中任一个的scfv序列。

327、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

328、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

329、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seqid no:19、29或37中任一个的scfv序列。

330、在一些实施方案中，本文提供了一种治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的方法，其包括向患者施用工程化t细胞群，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

331、在一些实施方案中，所述方法还包括在向患者施用工程化t细胞群之前评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病。

332、在一些实施方案中，自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征和肺部病状组成的组。

333、在一些实施方案中，患者疑似患有ebv感染或已被诊断为患有ebv感染。

334、在一些实施方案中，患者疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症。

335、在一些实施方案中，所述方法还包括向患者施用第二、第三、第四、第五或第六剂量的工程化t细胞。

336、在一些实施方案中，在第一、第二、第三、第四、第五和/或第六剂量的工程化t细胞中的一个或多个中是相同的。

337、在一些实施方案中，car在第一、第二、第三、第四、第五和/或第六剂量的工程化t细胞中的一个或多个中是不同的。

338、在一些实施方案中，car具有seq id no:19、29、37、45、54、85、63、72或118中任一个的scfv序列，或其中car具有包含seq id no:129-132或135-172中任一个的重链和轻链序列的scfv序列。

339、在一些实施方案中，car具有seq id no:32、34、36、117、91、92、92、128、133和134中任一个的序列。

340、根据权利要求1-78中任一项所述的方法，其中所述工程化t细胞包含cd19特异性car和cd20特异性car。

341、在一些实施方案中，cd19特异性car具有seq id no:117的cdr序列，并且cd22 car具有seq id no:45的cdr序列。

342、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

343、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由单一双特异性car编码。

344、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

345、在一些实施方案中，cd19 car t细胞和cd20 car t细胞同时施用。

346、在一些实施方案中，cd19 car+t细胞和cd20 car+t细胞按顺序施用。

347、在一些实施方案中，在施用cd20 car+t细胞之前施用cd19car+t细胞。

348、在一些实施方案中，在施用cd19 car+t细胞之前施用cd20car+t细胞。

349、在一些实施方案中，以治疗有效量的cd19和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独cd19 car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

350、在一些实施方案中，以治疗有效量的cd19和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独cd19 car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

351、在一些实施方案中，工程化t细胞包含ebv抗原特异性car和cd20特异性car。

352、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd20特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

353、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd20特异性car由单一双特异性car编码。

354、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd20特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

355、在一些实施方案中，ebv抗原car t细胞和cd20 car t细胞同时施用。

356、在一些实施方案中，ebv抗原car+t细胞和cd20 car+t细胞按顺序施用。

357、在一些实施方案中，在施用cd20 car+t细胞之前施用ebv抗原car+t细胞。

358、在一些实施方案中，在施用ebv抗原car+t细胞之前施用cd20 car+t细胞。

359、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

360、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

361、在一些实施方案中，工程化t细胞包含ebv抗原特异性car和cd19特异性car。

362、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd19特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

363、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd19特异性car由单一双特异性car编码。

364、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd19特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

365、在一些实施方案中，ebv抗原car t细胞和cd19 car t细胞同时施用。

366、在一些实施方案中，ebv抗原car+t细胞和cd19 car+t细胞按顺序施用。

367、在一些实施方案中，在施用cd19 car+t细胞之前施用ebv抗原car+t细胞。

368、在一些实施方案中，在施用ebv抗原car+t细胞之前施用cd19 car+t细胞。

369、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd19 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd19 car t细胞施用的细胞数目。

370、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd19 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd19 car t细胞施用的细胞数目。

371、在一些实施方案中，工程化t细胞包含ebv抗原特异性car和cd22特异性car。

372、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd22特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

373、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd22特异性car由单一双特异性car编码。

374、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd22特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

375、在一些实施方案中，ebv抗原car t细胞和cd22 car t细胞同时施用。

376、在一些实施方案中，ebv抗原car+t细胞和cd22 car+t细胞按顺序施用。

377、在一些实施方案中，在施用cd22 car+t细胞之前施用ebv抗原car+t细胞。

378、在一些实施方案中，在施用ebv抗原car+t细胞之前施用cd22 car+t细胞。

379、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd22 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd22 car t细胞施用的细胞数目。

380、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd22 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd22 car t细胞施用的细胞数目。

381、在一些实施方案中，工程化t细胞是原代t细胞、从原代t细胞或其后代繁殖，或来源于从ipsc或其后代分化的t细胞。

382、在一些实施方案中，工程化t细胞是来源于诱导性多能干细胞或其后代的分化细胞。

383、在一些实施方案中，分化细胞是t细胞或自然杀伤(nk)细胞。

384、在一些实施方案中，工程化t细胞是原代t细胞或是原代免疫细胞的后代，任选地其中原代免疫细胞的后代是t细胞或nk细胞。

385、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc hla i类分子的表达。

386、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc hla ii类分子的表达。

387、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc hla i类分子和一种或多种mhc hla ii类分子的表达。

388、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和/或ciita的表达。

389、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达b2m和/或ciita。

390、在一些实施方案中，工程化t细胞包含减少的trac和/或trb的表达。

391、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达trac和/或trb。

392、在一些实施方案中，工程化t细胞包含减少的trac的表达。

393、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达trac。

394、在一些实施方案中，工程化t细胞包含减少的trb的表达。

395、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达trb。

396、在一些实施方案中，工程化t细胞包含减少的trac和trb的表达。

397、在一些实施方案中，一种或多种致耐受因子选自由以下组成的组：cd47、cd24、cd27、cd35、cd46、cd55、cd59、cd200、hla-c、hla-e、hla-e重链、hla-g、pd-l1、ido1、ctla4-ig、c1抑制剂、il-10、il-35、fasl、ccl21、ccl22、mfge8、a20/tnfaip3、cd39、cr1、hla-f、il15-rf和manf以及serpinb9，任选地其中一种或多种致耐受因子包括cd47。

398、在一些实施方案中，cd19特异性car和一种或多种致耐受因子由单一双顺反子多核苷酸编码。

399、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd47由单一双顺反子多核苷酸编码。

400、在一些实施方案中，cd20特异性car和一种或多种致耐受因子由单一双顺反子多核苷酸编码。

401、在一些实施方案中，cd20特异性car和cd47由单一双顺反子多核苷酸编码。

402、在一些实施方案中，将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸中的一个或多个插入到细胞的至少一个等位基因的第一、第二和/或第三特定基因座中。

403、在一些实施方案中，第一、第二和/或第三特定基因座选自由以下组成的组：安全港基因座、靶标基因座、rhd基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。

404、在一些实施方案中，安全港基因座选自由以下组成的组：ccr5基因座、ppp1r12c基因座、clybl基因座和rosa基因座。

405、在一些实施方案中，靶标基因座选自由以下组成的组：cxcr4基因座、alb基因座、shs231基因座、f3(cd142)基因座、mica基因座、micb基因座、lrp1(cd91)基因座、hmgb1基因座、abo基因座、fut1基因座和kdm5d基因座。

406、在一些实施方案中，使用基因疗法载体或选自由转座酶、piggybac转座子、睡美人(sb11)转座子、mos1转座子和tol2转座子组成的组的转座酶系统将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

407、在一些实施方案中，基因疗法载体是逆转录病毒或融合体。

408、在一些实施方案中，使用crispr/cas基因编辑将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

409、在一些实施方案中，crispr/cas系统包含选自由cas9、cas12a和cas12b组成的组的cas效应蛋白。

410、在一些实施方案中，crispr/cas系统包含选自由以下组成的组的cas效应蛋白：

411、(a)任选地选自由cas3、cas8a、cas5、cas8b、cas8c、cas10d、cse1、cse2、csy1、csy2、csy3和gsu0054组成的组；

412、(b)任选地选自由cas9、csn2和cas4组成的组；

413、(c)任选地选自由cas10、csm2、cmr5、cas10、csx11和csx10组成的组；

414、(d)任选地csf1；

415、(e)任选地选自由cas12a、cas12b、cas12c、c2c4、c2c8、c2c5、c2c10、c2c9、casx(cas12e)和casy(cas12d)组成的组；以及

416、(f)任选地选自由cas13、cas13a、c2c2、cas13b、cas13c和cas13d组成的组。

417、在一些实施方案中，crispr/cas基因编辑从供体受试者离体进行。

418、在一些实施方案中，使用慢病毒载体将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

419、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于患者后逃避nk细胞介导的细胞毒性。

420、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于患者后受到保护而免于成熟nk细胞的细胞裂解。

421、在一些实施方案中，工程化t细胞逃避巨噬细胞介导的细胞毒性，任选地其中巨噬细胞介导的细胞毒性涉及吞噬作用和/或活性氧物质。

422、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于患者后不诱导对细胞的免疫反应。

423、在一些实施方案中，施用选自由静脉内注射、肌内注射、血管内注射和移植组成的组。

424、在一些实施方案中，在对患者开始不同的治疗方案之前、期间或之后施用工程化t细胞。

425、在一些实施方案中，不同的治疗方案选自由以下组成的组：重新给药相同或不同的细胞，以及预治疗、同时治疗或随后用附加剂治疗。

426、在一些实施方案中，不同的细胞是自体t或nk细胞或car-t细胞，其表达的第一car不同于工程化car-t细胞表达的第二car。

427、在一些实施方案中，患者在施用工程化t细胞之前用免疫耗竭疗法进行治疗。

428、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺。

429、在一些实施方案中，患者已经接受过先前的抗体疗法。

430、在一些实施方案中，抗体疗法是利妥昔单抗。

431、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约1-50mg/m2的氟达拉滨约1-7天。

432、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约1、约5、约10、约20、约30、约40或约50mg/m2的氟达拉滨约1、约2、约3、约4、约5、约6或约7天。

433、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约30mg/m2的氟达拉滨约4天。

434、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约100-1000mg/m2的环磷酰胺约1-7天。

435、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约100、约200、约300、约400、约500、约600、约700、约800、约900、约1000mg/m2的环磷酰胺约1、约2、约3、约4、约5、约6或约7天。

436、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约500mg/m2的环磷酰胺约2天。

437、在一些实施方案中，向患者施用至少约40x104个工程化t细胞。

438、在一些实施方案中，向患者施用至少约40x105个工程化t细胞。

439、在一些实施方案中，工程化t细胞在受试者体内持续存在至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或更长时间。

440、在一些实施方案中，工程化t细胞的治疗效果持续至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或更长的持续时间。

441、在一些实施方案中，野生型细胞或对照细胞是起始材料。

442、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有ebv感染或已被诊断患有ebv感染的患者的ebv感染的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种主要组织相容性复合物(mhc)i类和/或ii类人白细胞抗原(hla)分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种嵌合抗原受体(car)的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

443、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有ebv感染或已被诊断患有ebv感染的患者的ebv感染的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19或cd22具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

444、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有ebv感染或已被诊断患有ebv感染的患者的ebv感染的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

445、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

446、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

447、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

448、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

449、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

450、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的tcr-α(trac)和/或tcr-β(trb)的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

451、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

452、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

453、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

454、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

455、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

456、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

457、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。

458、在一些实施方案中，一种或多种car包含cd8α铰链结构域、cd28铰链结构域或igg4铰链结构域。

459、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:9的氨基酸序列的cd8α铰链结构域。

460、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:10或113的氨基酸序列的cd28铰链结构域。

461、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:11或12的氨基酸序列的igg4铰链结构域。

462、在一些实施方案中，一种或多种car包含cd8α跨膜结构域或cd28跨膜结构域。

463、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:14的氨基酸序列的cd8α跨膜结构域。

464、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:15或114的氨基酸序列的cd28跨膜结构域。

465、在一些实施方案中，一种或多种car包含4-1bb共刺激结构域、cd28共刺激结构域或cd3ζ信号传导结构域。

466、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:16的氨基酸序列的4-1bb共刺激结构域。

467、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:17的氨基酸序列的cd28共刺激结构域。

468、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:18或115的氨基酸序列的cd3ζ信号传导结构域。

469、在一些实施方案中，一种或多种car包含细胞外配体结合结构域，所述细胞外配体结合结构域包含seq id no:19、29、37、45、54、85、63、72或118中任一个的scfv序列，或其中car具有包含seq id no:129-132或135-172中任一个的重链和轻链序列的scfv序列。

470、在一些实施方案中，一种或多种car具有seq id no:32、34、36、117、91、92、92、128、133或134中任一个的序列。

471、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:37的cdr序列的cd20 car。

472、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:133或134的cdr序列和/或来自seq id no:129-132或135-172的vh/vl序列的cdr序列的ebv抗原car。

473、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car。

474、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:45的cdr序列的cd22 car。

475、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac和/或trb的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car和具有seq id no:45的cdr序列的cd22car。

476、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症的患者的多发性硬化症的用途，其中工程化t细胞包含编码一种或多种car的外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36、117、91、92、92、128、133或134中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29、37、45、54、85、63、72或118中任一个的scfv序列，或其中car具有包含seq id no:129-132或135-172中任一个的重链和轻链序列的scfv序列。

477、在一些实施方案中，所述用途还包括在向患者施用工程化t细胞群之前评估患者的ebv感染和任选地多发性硬化症和/或诊断患者患有ebv感染和任选地多发性硬化症。

478、在一些实施方案中，诊断包括评估患者的ebv感染。

479、在一些实施方案中，诊断包括评估患者的多发性硬化症。

480、在一些实施方案中，所述治疗预防多发性硬化症。

481、在一些实施方案中，所述治疗治疗多发性硬化症。

482、在一些实施方案中，患有ebv感染的患者已被诊断患有多发性硬化症。

483、在一些实施方案中，多发性硬化症是复发缓解型多发性硬化症、原发进展型多发性硬化症或继发进展型多发性硬化症。

484、在一些实施方案中，患者在施用工程化t细胞后发生多发性硬化症的缓解。

485、在一些实施方案中，患有ebv感染的患者正在接受ebv感染的治疗。

486、在一些实施方案中，患有ebv感染的患者患有活动性ebv感染。

487、在一些实施方案中，患有ebv感染的患者患有非活动性ebv感染。

488、在一些实施方案中，患者在施用工程化t细胞后ebv感染减少，任选地其中ebv感染减少通过病毒载量减少来表征。

489、在一些实施方案中，治疗防止ebv感染从非活动性ebv感染转变为活动性ebv感染。

490、在一些实施方案中，所述用途导致b细胞耗竭。

491、在一些实施方案中，工程化t细胞包含cd19特异性car、cd20特异性car、cd22特异性car、bcma特异性car、gprc5d特异性car、cd38特异性car、cd70特异性car、cd79b特异性car和ebv抗原特异性car中的一种或多种。

492、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含编码一种或多种car的外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

493、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

494、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

495、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

496、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

497、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包含对cd19、cd20、cd22、bcma或ebv抗原具有特异性的细胞外配体结合结构域、铰链结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

498、在一些实施方案中，一种或多种car包含cd8α铰链结构域、cd28铰链结构域或igg4铰链结构域。

499、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:9的氨基酸序列的cd8α铰链结构域。

500、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:10或113的氨基酸序列的cd28铰链结构域。

501、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:11或12的氨基酸序列的igg4铰链结构域。

502、在一些实施方案中，一种或多种car包含cd8α跨膜结构域或cd28跨膜结构域。

503、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:14的氨基酸序列的cd8α跨膜结构域。

504、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:15或114的氨基酸序列的cd28跨膜结构域。

505、在一些实施方案中，一种或多种car包含4-1bb共刺激结构域、cd28共刺激结构域或cd3ζ信号传导结构域。

506、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:16的氨基酸序列的4-1bb共刺激结构域。

507、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:17的氨基酸序列的cd28共刺激结构域。

508、在一些实施方案中，一种或多种car包含具有seq id no:18或115的氨基酸序列的cd3ζ信号传导结构域。

509、在一些实施方案中，一种或多种car包含细胞外配体结合结构域，所述细胞外配体结合结构域包含seq id no:19、29、37、45、54、85、63、72或118中任一个的scfv序列，或其中car具有包含seq id no:129-132或135-172中任一个的重链和轻链序列的scfv序列。

510、在一些实施方案中，一种或多种car具有seq id no:32、34、36、117、91、92、92、128、133或134中任一个的序列。

511、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

512、在一些实施方案中，用途还包括评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病。

513、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:117的cdr序列的cd19 car和具有seq id no:45的cdr序列的cd22 car，并且其中自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征或肺部病状组成的组。

514、在一些实施方案中，编码的cd19 car具有seq id no:117中列出的对应氨基酸序列或与seq id no:117中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)，具有以下组分：cd8α信号肽、fmc63 scfv(vl-whitlow接头-vh)、cd8α铰链结构域、cd8α跨膜结构域、4-1bb共刺激结构域和cd3ζ信号传导结构域。

515、在一些实施方案中，编码的cd22 car具有seq id no:45中列出的对应氨基酸序列或与seq id no:45中列出的氨基酸序列具有至少80％同一性(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)。

516、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m、ciita和trac的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car包括具有seq id no:133或134的cdr序列和/或来自seq id no:129-132或135-172的vh/vl序列的cdr序列的ebv抗原特异性car，并且其中自身免疫性疾病是多发性硬化症。

517、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含编码一种或多种car的外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

518、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

519、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq idno:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

520、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码致耐受因子的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

521、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

522、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和ciita的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq idno:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

523、在一些实施方案中，本文提供了工程化t细胞群用于治疗疑似患有自身免疫性疾病或已被诊断患有自身免疫性疾病的患者的自身免疫性疾病的用途，其中工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc i类和/或ii类hla分子的表达、编码cd47的第一外源多核苷酸和编码一种或多种car的第二外源多核苷酸，其中一种或多种car具有seq id no:32、34、36和117中任一个的序列，或其中一种或多种car具有seq id no:19、29或37中任一个的scfv序列。

524、在一些实施方案中，所述用途还包括在向患者施用工程化t细胞群之前评估患者的自身免疫性疾病和/或诊断患者患有自身免疫性疾病。

525、在一些实施方案中，自身免疫性疾病选自由狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬化症、血管炎、克罗恩氏病、重症肌无力、僵人综合征和肺部病状组成的组。

526、在一些实施方案中，患者疑似患有ebv感染或已被诊断为患有ebv感染。

527、在一些实施方案中，患者疑似患有多发性硬化症或已被诊断患有多发性硬化症。

528、在一些实施方案中，所述用途还包括向患者施用第二、第三、第四、第五或第六剂量的工程化t细胞。

529、在一些实施方案中，在第一、第二、第三、第四、第五和/或第六剂量的工程化t细胞中的一个或多个中是相同的。

530、在一些实施方案中，car在第一、第二、第三、第四、第五和/或第六剂量的工程化t细胞中的一个或多个中是不同的。

531、在一些实施方案中，car具有seq id no:19、29、37、45、54、85、63、72或118中任一个的scfv序列，或其中car具有包含seq id no:129-132或135-172中任一个的重链和轻链序列的scfv序列。

532、在一些实施方案中，car具有seq id no:32、34、36、117、91、92、92、128、133和134中任一个的序列。

533、在一些实施方案中，工程化t细胞包含cd19特异性car和cd20特异性car。

534、在一些实施方案中，cd19特异性car具有seq id no:117的cdr序列，并且cd22 car具有seq id no:45的cdr序列。

535、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

536、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由单一双特异性car编码。

537、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd20特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

538、在一些实施方案中，cd19 car t细胞和cd20 car t细胞同时施用。

539、在一些实施方案中，cd19 car+t细胞和cd20 car+t细胞按顺序施用。

540、在一些实施方案中，在施用cd20 car+t细胞之前施用cd19car+t细胞。

541、在一些实施方案中，在施用cd19 car+t细胞之前施用cd20car+t细胞。

542、在一些实施方案中，以治疗有效量的cd19和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独cd19 car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

543、在一些实施方案中，以治疗有效量的cd19和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独cd19 car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

544、在一些实施方案中，工程化t细胞包含ebv抗原特异性car和cd20特异性car。

545、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd20特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

546、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd20特异性car由单一双特异性car编码。

547、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd20特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

548、在一些实施方案中，ebv抗原car t细胞和cd20 car t细胞同时施用。

549、在一些实施方案中，ebv抗原car+t细胞和cd20 car+t细胞按顺序施用。

550、在一些实施方案中，在施用cd20 car+t细胞之前施用ebv抗原car+t细胞。

551、在一些实施方案中，在施用ebv抗原car+t细胞之前施用cd20 car+t细胞。

552、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

553、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd20 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd20 car t细胞施用的细胞数目。

554、在一些实施方案中，工程化t细胞包含ebv抗原特异性car和cd19特异性car。

555、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd19特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

556、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd19特异性car由单一双特异性car编码。

557、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd19特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

558、在一些实施方案中，ebv抗原car t细胞和cd19 car t细胞同时施用。

559、在一些实施方案中，ebv抗原car+t细胞和cd19 car+t细胞按顺序施用。

560、在一些实施方案中，在施用cd19 car+t细胞之前施用ebv抗原car+t细胞。

561、在一些实施方案中，在施用ebv抗原car+t细胞之前施用cd19 car+t细胞。

562、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd19 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd19 car t细胞施用的细胞数目。

563、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd19 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd19 car t细胞施用的细胞数目。

564、在一些实施方案中，工程化t细胞包含ebv抗原特异性car和cd22特异性car。

565、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd22特异性car由单一双顺反子多核苷酸编码。

566、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd22特异性car由单一双特异性car编码。

567、在一些实施方案中，ebv抗原特异性car和cd22特异性car由两种单独的多核苷酸编码。

568、在一些实施方案中，ebv抗原car t细胞和cd22 car t细胞同时施用。

569、在一些实施方案中，ebv抗原car+t细胞和cd22 car+t细胞按顺序施用。

570、在一些实施方案中，在施用cd22 car+t细胞之前施用ebv抗原car+t细胞。

571、在一些实施方案中，在施用ebv抗原car+t细胞之前施用cd22 car+t细胞。

572、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd22 car t细胞施用的细胞数目大于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd22 car t细胞施用的细胞数目。

573、在一些实施方案中，以治疗有效量的ebv抗原和/或cd22 car t细胞施用的细胞数目小于以治疗有效量的单独ebv抗原car t细胞或cd22 car t细胞施用的细胞数目。

574、在一些实施方案中，工程化t细胞是原代t细胞、从原代t细胞或其后代繁殖，或来源于从ipsc或其后代分化的t细胞。

575、在一些实施方案中，工程化t细胞是来源于诱导性多能干细胞或其后代的分化细胞。

576、在一些实施方案中，分化细胞是t细胞或自然杀伤(nk)细胞。

577、在一些实施方案中，工程化t细胞是原代t细胞，是原代免疫细胞的后代，任选地其中原代免疫细胞的后代是t细胞或nk细胞。

578、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc hla i类分子的表达。

579、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc hla ii类分子的表达。

580、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的一种或多种mhc hla i类分子和一种或多种mhc hla ii类分子的表达。

581、在一些实施方案中，工程化t细胞包含相对于未改变或未修饰的野生型或对照细胞降低的b2m和/或ciita的表达。

582、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达b2m和/或ciita。

583、在一些实施方案中，工程化t细胞包含减少的trac和/或trb的表达。

584、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达trac和/或trb。

585、在一些实施方案中，工程化t细胞包含减少的trac的表达。

586、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达trac。

587、在一些实施方案中，工程化t细胞包含减少的trb的表达。

588、在一些实施方案中，工程化t细胞不表达trb。

589、在一些实施方案中，工程化t细胞包含减少的trac和trb的表达。

590、在一些实施方案中，一种或多种致耐受因子选自由以下组成的组：cd47、cd24、cd27、cd35、cd46、cd55、cd59、cd200、hla-c、hla-e、hla-e重链、hla-g、pd-l1、ido1、ctla4-ig、c1抑制剂、il-10、il-35、fasl、ccl21、ccl22、mfge8、a20/tnfaip3、cd39、cr1、hla-f、il15-rf、manf以及serpinb9，任选地其中一种或多种致耐受因子包括cd47。

591、在一些实施方案中，cd19特异性car和一种或多种致耐受因子由单一双顺反子多核苷酸编码。

592、在一些实施方案中，cd19特异性car和cd47由单一双顺反子多核苷酸编码。

593、在一些实施方案中，cd20特异性car和一种或多种致耐受因子由单一双顺反子多核苷酸编码。

594、在一些实施方案中，cd20特异性car和cd47由单一双顺反子多核苷酸编码。

595、在一些实施方案中，将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸中的一个或多个插入到细胞的至少一个等位基因的第一、第二和/或第三特定基因座中。

596、在一些实施方案中，第一、第二和/或第三特定基因座选自由以下组成的组：安全港基因座、靶标基因座、rhd基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座和trb基因座。

597、在一些实施方案中，安全港基因座选自由以下组成的组：ccr5基因座、ppp1r12c基因座、clybl基因座和rosa基因座。

598、在一些实施方案中，靶标基因座选自由以下组成的组：cxcr4基因座、alb基因座、shs231基因座、f3(cd142)基因座、mica基因座、micb基因座、lrp1(cd91)基因座、hmgb1基因座、abo基因座、fut1基因座和kdm5d基因座。

599、在一些实施方案中，使用基因疗法载体或选自由转座酶、piggybac转座子、睡美人(sb11)转座子、mos1转座子和tol2转座子组成的组的转座酶系统将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

600、在一些实施方案中，基因疗法载体是逆转录病毒或融合体。

601、在一些实施方案中，使用crispr/cas基因编辑将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

602、在一些实施方案中，crispr/cas系统包含选自由cas9、cas12a和cas12b组成的组的cas效应蛋白。

603、在一些实施方案中，crispr/cas系统包含选自由以下组成的组的cas效应蛋白：

604、(a)任选地选自由cas3、cas8a、cas5、cas8b、cas8c、cas10d、cse1、cse2、csy1、csy2、csy3和gsu0054组成的组；

605、(b)任选地选自由cas9、csn2和cas4组成的组；

606、(c)任选地选自由cas10、csm2、cmr5、cas10、csx11和csx10组成的组；

607、(d)任选地csf1；

608、(e)任选地选自由cas12a、cas12b、cas12c、c2c4、c2c8、c2c5、c2c10、c2c9、casx(cas12e)和casy(cas12d)组成的组；以及

609、(f)任选地选自由cas13、cas13a、c2c2、cas13b、cas13c和cas13d组成的组。

610、在一些实施方案中，crispr/cas基因编辑从供体受试者离体进行。

611、在一些实施方案中，使用慢病毒载体将第一、第二和/或第三外源多核苷酸或双顺反子多核苷酸引入到工程化t细胞中。

612、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于患者后逃避nk细胞介导的细胞毒性。

613、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于患者后受到保护而免于成熟nk细胞的细胞裂解。

614、在一些实施方案中，工程化t细胞逃避巨噬细胞介导的细胞毒性，任选地其中巨噬细胞介导的细胞毒性涉及吞噬作用和/或活性氧物质。

615、在一些实施方案中，工程化t细胞在施用于患者后不诱导对细胞的免疫反应。

616、在一些实施方案中，施用选自由静脉内注射、肌内注射、血管内注射和移植组成的组。

617、在一些实施方案中，在对患者开始不同的治疗方案之前、期间或之后施用工程化t细胞。

618、在一些实施方案中，不同的治疗方案选自由以下组成的组：重新给药相同或不同的细胞，以及预治疗、同时治疗或随后用附加剂治疗。

619、在一些实施方案中，不同的细胞是自体t或nk细胞或car-t细胞，其表达的第一car不同于工程化car-t细胞表达的第二car。

620、在一些实施方案中，患者在施用工程化t细胞之前用免疫耗竭疗法进行治疗。

621、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括施用氟达拉滨和/或环磷酰胺。

622、在一些实施方案中，患者已经接受过先前的抗体疗法。

623、在一些实施方案中，抗体疗法是利妥昔单抗。

624、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约1-50mg/m2的氟达拉滨约1-7天。

625、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约1、约5、约10、约20、约30、约40或约50mg/m2的氟达拉滨约1、约2、约3、约4、约5、约6或约7天。

626、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约30mg/m2的氟达拉滨约4天。

627、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约100-1000mg/m2的环磷酰胺约1-7天。

628、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约100、约200、约300、约400、约500、约600、约700、约800、约900、约1000mg/m2的环磷酰胺约1、约2、约3、约4、约5、约6或约7天。

629、在一些实施方案中，免疫耗竭疗法包括iv输注约500mg/m2的环磷酰胺约2天。

630、在一些实施方案中，向患者施用至少约40x104个工程化t细胞。

631、在一些实施方案中，向患者施用至少约40x105个工程化t细胞。

632、在一些实施方案中，工程化t细胞在受试者体内持续存在至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或更长时间。

633、在一些实施方案中，工程化t细胞的治疗效果持续至少4周、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月或更长的持续时间。

634、在一些实施方案中，野生型细胞或对照细胞是起始材料。

635、本公开涉及2020年12月31日提交的美国临时申请(代理人案卷号112864-5057-pr)以及morrison和foerester在2021年1月11日提交的代理人案卷号为18615-30046.00的美国临时申请，所述临时申请的内容特此通过引用整体并入。工程化和/或低免疫原性细胞、其生产方法及其使用方法的详细描述可见于2020年8月13日提交的美国临时申请号63/065,342、2015年5月9日提交的wo2016/183041、2018年1月14日提交的wo2018/132783、2019年7月17日提交的wo2020/018615、2019年7月17日提交的wo2020/018620、2020年2月16日提交的wo2020/168317，所述申请的包括实施例、序列表和附图的公开内容通过引用整体并入本文。