一种高稳定性多柔比星脂质体注射制剂及其制备工艺的制作方法

本发明涉及脂质体制剂，具体为一种高稳定性多柔比星脂质体注射制剂及其制备工艺。

背景技术：

1、多柔比星是蒽环类(anthracycline)抗生素，为抗有丝分裂的细胞毒性药物，能有效地诱导多种恶性肿瘤的缓解，包括急性白血病、淋巴瘤、软组织和骨肉瘤、儿童恶性肿瘤及成人实体瘤，尤其用于乳腺癌和肺癌。因多柔比星原药不稳定，因而市售多柔比星一般以盐酸多柔比星的形式存在；但同时盐酸多柔比星对神经具有毒性，所以现有技术普遍都是将其包封在表面结合有甲氧基聚乙二醇的脂质体中，在平衡毒性的同时，进一步保护脂质体不受单核巨噬细胞的识别，延长其在血液循环中的时间。

2、但大多数现有技术得到的多柔比星脂质体在配制成储存液后，并不能实现长期稳定储存，即储存稳定性差，这无疑会使得药品的药效下降，加重副作用影响。而实现药物长期稳定储存则需要脂质体具有优异的稳定性，其稳定性具体表现在化学稳定性和物理稳定性两方面，两者综合对脂质体内部的载药量有着重要影响。其中，化学稳定性主要体现在脂质体的磷脂是否易被氧化，若易被氧化，则更会引起药物渗漏，然后其发生降解，逐渐失去药物活性；物理稳定性主要体现在脂质体对药物的渗漏率，渗漏率越大，即表明渗漏量越多，也会有大量的药物发生降解，失去药物活性。即表明脂质体的稳定性能不佳，都会导致脂质体内部的载药量降低，进而直接影响到临床应用剂量的，使药物达不到临床需要。

3、综上所述，本发明将提供一种高稳定性多柔比星脂质体注射制剂，该注射制剂具有最佳的储存稳定性，能长期稳定的保留药物特性，满足临床需要，具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种高稳定性多柔比星脂质体注射制剂及其制备工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

3、一种高稳定性多柔比星脂质体注射制剂的制备工艺，包括以下步骤：

4、s1：制备多柔比星脂质体：

5、s11：(1)按重量份数计，将20～25份的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基加入到200份的二氯甲烷中，搅拌溶解后，加入5～8份的δ-生育酚、0.5～1份的催化剂、4～5份的催化促进剂，于室温下，避光反应2～12h，结束反应，经过滤，除去滤渣，收集滤液；(2)将滤液倒入200份的乙醚中，于-20～-5℃下静置3～6h，经过滤，除去滤液，收集滤渣，干燥，得到二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生育酚；

6、s12：(1)按重量份数计，将35～45份的氢化卵磷脂、10～15份的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生育酚、10～15份的胆固醇加入到150份的无水乙醇中，搅拌溶解，得到类脂溶液；(2)将类脂溶液水浴加热至50～65℃后，在10000～15000r/min的转速下进行高速剪切，同时向其中加入200份的200～250mmol/l的硫酸铵溶液，待高速剪切10～30min后，采用挤出器挤出过滤2～3次，得到空白脂质体粗品；

7、s13：室温下，采用缓冲液a对空白脂质体粗品进行透析处理，得到空白脂质体悬浊液；

8、s14：(1)将盐酸多柔比星加入到去离子水中，配制成浓度为3～5wt％的多柔比星溶液；(2)向空白脂质体悬浊液中加入多柔比星溶液，混合均匀后，将其水浴加热至55～65℃保温10～30min，然后将其移入冰水浴冷，使其停止载药，再进行除菌处理，最后在25～30℃下减压旋蒸，得到多柔比星脂质体，并置于2～5℃下保存备用；

9、s2：将多柔比星脂质体、复合注射用水配制成高稳定性多柔比星脂质体注射制剂后，置于2～5℃下，避光密封保存备用。

10、进一步的，所述催化剂包括但不限于4-二甲氨基吡啶、4-吡咯烷基吡啶、1-羟基苯丙三氮唑中的任意一种。

11、进一步的，所述催化促进剂包括但不限于n,n’-二环己基碳二亚胺、n,n’-二异丙基碳二酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺中的任意一种。

12、4-二甲氨基吡啶是一种高效催化剂，主要应用于在醇、酚、胺的酰化及酚交换等有机反应中，其与传统的酰化催化剂相比，其催化酰化反应具有反应速度快、反应温度低、收率高等优点；在n,n’-二环己基碳二亚胺的协同作用下，4-二甲氨基吡啶可催化有位阻的酸和醇(或酚)的酚化反应，具有更强烈的反应活性。

13、进一步的，所述缓冲液a包括以下组分：按重量份数计，柠檬酸钠5～10份、组氨酸2～5份、蔗糖5～15份、去离子水100份，加入柠檬酸调节ph至5.5～6.5。

14、进一步的，所述挤出器为脂质体挤出器，其中，采用的过滤膜的孔径为0.05～0.45μm。

15、进一步的，所述空白脂质体粗品、缓冲液a两者比例为3g:100ml。

16、进一步的，所述空白脂质体悬浊液、多柔比星溶液两者体积比为10:1。

17、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇为聚乙二醇修饰物，兼有亲水性和柔顺性，能在脂质体表面形成一层水化膜，阻碍血浆成分与脂质体表面吸附，从而降低网状内皮系统对脂质体的摄取，使脂质体在体循环中的时间延长，进而使脂质体内的药物缓慢释放，更好的吸收利用；δ-生育酚是一种对人体无害的抗氧化剂，可以对脂质体氧化阻断起到积极作用。因此本发明中，为了增强脂质体的化学稳定性，将含有二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇结构的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基和δ-生育酚反应接枝，制备得到二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生育酚，以实现对脂质体化学稳定性的增强的目的。

18、考虑到生育酚在碱性条件下不稳定，同时为了避免在透析处理过程中空白脂质体发生氧化，方案中对缓冲液进行了相应配制，采用柠檬酸-柠檬酸钠型缓冲液对空白脂质体粗品进行透析。同时缓冲液加入了组氨酸，可进一步协同调节ph，削弱ph变化对脂质体的影响；加入蔗糖对脂质体起到赋形作用，避免脂质体膜层融合，进一步使脂质体结构稳定，进而使其包封率和载药量得到提高。最终综合得到结构稳定、包封率高、载药量高的脂质体，其长期储存性能优异。

19、进一步的，所述复合注射用水由缓冲液b、注射用水以体积比1:(1～2)混合得到。

20、进一步的，所述缓冲液b包括以下组分：按重量份数计，柠檬酸钠1～2份、葡萄糖0.5～2份、稳定剂2～3份、去离子水25份，加入柠檬酸调节ph至5.5～6.5。

21、进一步的，所述稳定剂为二鲸蜡磷酸酯、磷脂酰丝氨酸以质量比1:1混合得到。

22、进一步的，所述高稳定性多柔比星脂质体注射制剂中，多柔比星脂质体的浓度为2mg/ml。

23、本发明中为了保障多柔比星脂质体的稳定性，配制了复合注射用水，其中含有缓冲液b，通过缓冲液b中的柠檬酸，进一步保障多柔比星脂质体的耐氧化性，保障其化学稳定性；实施例中，稳定剂采用二鲸蜡磷酸酯和磷脂酰丝氨酸，两者可以吸附结合在脂质体表面，增强脂质体的稳定性，有效降低存储过程中的渗漏率，保障其物理稳定性；在注射进患者体内后，两者还可以增强多柔比星脂质体的靶向性，以减少药物的毒性作用，从而提高药物的疗效。

24、与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：

25、(1)本发明从对脂质体化学稳定性、物理稳定性两方面考量，综合制备得到了具有良好稳定性的多柔比星脂质体；化学稳定性方面：从空白脂质体的制备到制成注射制剂，都减少脂质体被氧化的可能性；物理稳定性方面：增强了多柔比星脂质体膜层的结构稳定性，有效降低其渗漏率；

26、(2)该多柔比星脂质体具有良好的包封率和载药量的同时，其结构稳定，不会因为储存过程中氧化、冰晶等，导致脂质体破裂，使得药物大幅渗漏，降低临床疗效；

27、(3)该多柔比星脂质体能够缓慢地在血液中释放，具有较长的药物作用时间；

28、(4)该多柔比星脂质体具有一定的靶向性，能够降低对药物的副作用影响，具有更好的药物疗效。