宋果灵纳米脂质体的制备及吸入治疗急性肺损伤的应用

本发明属于药物制剂，涉及宋果灵纳米脂质体的制备及吸入治疗急性肺损伤的应用。

背景技术：

1、急性肺损伤(acute lung injury，ali)是急性呼吸窘迫综合征的最严重表现，具有炎症反应重、组织损伤重、高病死率等特点。目前针对ali患者的治疗策略主要为机械通气和抗炎药物治疗。2021年一项流行病学调查显示：1909例有创通气的新冠病毒感染患者中，1672例(86.7％)出现急性呼吸窘迫综合征，且患者死亡率高达57.7％。机械通气虽能在一定程度上缓解症状，但患者死亡率仍然较高；最常用的抗炎药物糖皮质激素虽能有效减缓炎症，但往往会抑制机体免疫系统，引发一系列副作用。因此，探寻新药物、开发更合理高效的治疗措施，对于ali的治疗意义非凡。

2、随着对中药中有效成分与机制的研究不断深入，近年来发现许多中药化合物都具有良好的药理活性，但天然化合物大多难溶于水，这就限制了其应用。为了提高化合物的水溶性和生物利用度，更好地发挥临床效用，亟需开发一种能增强化合物疗效且稳定性高的纳米包裹载体。萜类为常见的脂溶性难溶组分，难溶于水，易溶于石油醚、苯、氯仿、乙醇等脂溶性溶剂中。

3、宋果灵(songorine，son)是从中药乌头中分离得到的一种二萜类生物碱，研究表明其为大鼠脑中的gabaa受体拮抗剂，具有抗癌、抗心律不齐和抗炎活性，但由于其分子结构中含有适合酚酶催化的反应底物，因此宋果灵的化学性质极不稳定，受热及见光易氧化。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供宋果灵纳米脂质体的制备及吸入治疗急性肺损伤的应用，以解决现有技术中存在的问题。

2、根据本发明的一个方面，提供了一种宋果灵纳米脂质体，包括芯材和膜材，其中芯材为宋果灵，膜材主要由磷脂、胆固醇和dspe-mpeg2000(聚乙二醇单甲醚-2000-二十八烷基磷脂酰乙醇胺，cas147867-65-0)制备得到；宋果灵、磷脂、胆固醇和dspe-mpeg2000的摩尔比为(10～18)：(75～80)：(18～22)：3，宋果灵纳米脂质体包封率为75.03％±0.5％。

3、本发明所提供的宋果灵纳米脂质体，具有良好的水溶性，解决了宋果灵难溶于水且化学性质不稳定、因此难以被应用于实际治疗的问题。脂质体中的磷脂组分为脂质体赋予了良好的肺部靶向性，使脂质体进入生物体内后可以被靶向运送到并作用于肺部，降低肺组织中tnf-α、il-6、il-1β等炎症因子的水平，改善肺部正常结构及其屏障的损伤，提高肺部的通透性，因此可被用于治疗急性肺损伤，且疗效显著优于游离的宋果灵单体。本发明所提供的宋果灵纳米脂质体还具有良好的生物安全性和相容性。

4、需要说明的是，脂质体中dppc(二棕榈酰磷脂酰胆碱)、胆固醇、dspe-mpeg2000和宋果灵的摩尔比，是脂质体制备过程中的投加量摩尔比。

5、在一些实施方式中，磷脂为dppc、大豆磷脂、蛋黄卵磷脂中的任意一种或多种。

6、在一些实施方式中，宋果灵纳米脂质体的载药量为7.24％±2％。

7、在一些实施方式中，宋果灵纳米脂质体为球形，平均直径为102±5nm。

8、在一些实施方式中，宋果灵纳米脂质体的zeta电位为-15±2mv。

9、根据本发明的另一个方面，提供了一种宋果灵纳米脂质体的制备方法，包括如下步骤：

10、s1.将磷脂、胆固醇、dspe-mpeg2000和宋果灵溶于溶剂中，旋蒸除去溶剂形成薄膜；

11、s2.向步骤s1形成的薄膜中加入水性介质，使薄膜充分水化脱落得到悬液，对悬液进行超声分散，超声的功率为10％～30％，超声结束后即可得到宋果灵纳米脂质体。

12、本发明中宋果灵纳米脂质体的制备方法为薄膜水化-超声分散法。

13、其中需要说明的是，脂质体的一般制备过程为：膜材成膜后再加入含有芯材的水性介质，使薄膜水化。然而本发明中，宋果灵是脂溶性药物，难溶于水，所以将其与膜材一起溶解，在膜材成膜的同时实现对芯材的包覆，最后除去有机溶剂，包封率较高，若膜材成膜后再加入原药芯材，无法使药物充分溶解，载药率和包封率会下降。

14、在一些实施方式中，步骤s1中先将磷脂、胆固醇和dspe-mpeg2000溶解于溶剂中，而后再采用溶剂溶解宋果灵，加入到反应体系中。

15、在一些实施方式中，还可选择二次乳化法、乙醇注入法或逆向蒸发法制备本发明中的宋果灵纳米脂质体。

16、在一些实施方式中，步骤s1中旋蒸除去溶剂形成薄膜的方式为在230mbar下进行旋蒸，直至溶剂全部蒸发。

17、在一些实施方式中，步骤s1为：将磷脂、胆固醇和dspe-mpeg2000加入到500ml的圆底烧瓶中，加入4ml的氯仿充分溶解后，将宋果灵用1ml氯仿溶解并加入到圆底烧瓶中，混匀后在230mbar下进行旋蒸，直至氯仿全部蒸发完，在圆底烧瓶壁上形成一层薄膜。

18、在一些实施方式中，步骤s2中的水性介质为pbs缓冲液。

19、在一些实施方式中，步骤s2中使薄膜充分水化脱落的温度为60℃。

20、在一些实施方式中，步骤s2在搅拌的条件下使薄膜充分水化脱落，搅拌的转速为300rpm。

21、在一些实施方式中，步骤s2中使薄膜充分水化脱落的时间为30min。

22、在一些实施方式中，步骤s2超声分散的操作具体为：将薄膜水化脱落得到的悬液置于冰上进行超声，超声功率为10％～30％(即仪器最大功率的10％～30％)，超声的模式为每超声15s，暂停15s，循环30min后结束超声。

23、上述超声分散的目的是提高所得脂质体粒径大小的均一性，进而提高其稳定性。在制备脂质体过程中，若粒径大小不均匀，会影响脂质体的质量和后续的实验结果。需要说明的是，由于本发明超声功率较小且时间较短，并严格在冰上操作，因此极大程度减少了超声操作对脂质体成分的破坏。

24、在一些实施方式中，步骤s2超声分散后还包括过滤、超滤和定容的步骤。

25、在一些实施方式中，上述过滤为：收集超声分散后的悬液，用0.22μm的过滤器过滤收集，取滤液。

26、在一些实施方式中，上述超滤为：将滤液转移至超滤管中并在3000rpm的转速下离心1h。这一步超滤的目的是除去未包裹宋果灵的脂质体以及游离的宋果灵单体。

27、在一些实施方式中，上述定容为：使用pbs缓冲液将超滤管中的宋果灵纳米脂质体定容至3ml，备用。

28、在一些实施方式中，步骤s2为：向步骤s1的圆底烧瓶中加入5ml pbs缓冲液，放入转子，在300rpm、60℃下搅拌30min，期间可手动旋转烧瓶使pbs缓冲液充分浸润烧瓶壁上的薄膜；30min后得到薄膜水化脱落形成的悬液，置于冰上进行超声，超声的功率为20％，超声的模式为每超声15s，暂停15s，循环30min后结束超声；收集超声分散后的悬液，用0.22μm的过滤器过滤收集，取滤液；将滤液转移至超滤管中并在3000rpm的转速下离心1h，使用pbs缓冲液将超滤管中的宋果灵纳米脂质体定容至3ml，备用。

29、根据本发明的另一个方面，提供了宋果灵纳米脂质体在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用。

30、在一些实施方式中，上述治疗急性肺损伤的药物的给药方式为雾化吸入给药。

31、根据本发明的另一个方面，提供了宋果灵纳米脂质体在制备肺部抗炎药物中的应用。

32、本发明所提供的宋果灵纳米脂质体能够降低肺组织中tnf-α、il-6、il-1β等炎症因子的水平，缓解肺组织的炎症，因此在制备肺部抗炎药物中具有良好的应用前景。

33、和现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

34、本发明所提供的宋果灵纳米脂质体，具有良好的生物安全性和相容性，且可以靶向作用于肺部，降低小鼠体内il-6，il-1β和tnf-α等炎症因子的表达水平，缓解炎症；同时可以提高zo-1，ve-cadherin和claudin5等蛋白的表达水平，缓解肺部屏障的损伤，实现对急性肺损伤小鼠的治疗，且治疗效果显著优于游离的宋果灵单体。