用于癌症治疗的结合HER2、NKG2D和CD16的多特异性结合蛋白的药物制剂和剂量方案的制作方法

本公开总的来说涉及具有结合表皮生长因子受体2(erbb2或her2)的单链可变片段(scfv)、结合nkg2d的fab和抗体fc结构域的多特异性结合蛋白的药物制剂，以及此类多特异性结合蛋白和药物制剂用于治疗癌症例如局部晚期或转移性实体肿瘤的剂量方案。

背景技术：

1、尽管在文献中已报道了治疗癌症的大量研究尝试和科学进展，但这种疾病依然是显著的健康问题。正在开发癌症免疫疗法，以利用患者自身的免疫系统促进癌细胞的破坏。被癌症免疫疗法激活的免疫细胞包括t细胞和自然杀伤(nk)细胞。例如，设计了双特异性t-细胞衔接物以引导t-细胞对抗肿瘤细胞，从而对所述肿瘤细胞产生细胞毒性。也已创造了结合nk细胞和肿瘤相关抗原(taa)的双特异性抗体，用于癌症治疗(参见例如wo 2016/134371)。

2、her2是表皮生长因子受体家族中的一种跨膜糖蛋白。它是一种受体酪氨酸激酶，并调控细胞存活、增殖和生长。her2在人类恶性肿瘤中发挥重要作用。在大约30％的人类乳腺癌中erbb2基因被扩增或过表达。具有her2过表达的乳腺癌的患者与具有不过表达her2的癌症的患者相比，具有实质上更低的总体生存率和更短的无病间期。此外，her2的过表达导致乳腺癌转移的增加。已知her2的过表达也发生在许多其他癌症类型中，包括卵巢、食管、膀胱和胃癌、唾液腺导管癌、肺腺癌和侵蚀性子宫癌，例如子宫浆液性内膜癌。

3、已研究了结合her2和一种或多种免疫细胞表面蛋白的多特异性结合蛋白。例如，wo 2018/152518描述了结合her2、nkg2d和cd16的多特异性结合蛋白。本公开对这些开发做出了补充，并提供了使用特异性靶向her2的癌症免疫疗法以所需的安全性和效能治疗患者的临床方法，包括剂量方案。此外，本公开通过提供包含此类癌症免疫疗法的足够稳定且适合于给药到患者的制剂，对所述领域中的早期开发做出了补充。

技术实现思路

1、本公开提供了包含多特异性结合蛋白的药物制剂，所述多特异性结合蛋白具有结合her2的scfv、结合nkg2d的fab和抗体fc结构域，所述制剂中的成分为所述多特异性结合蛋白的稳定进行了优化。还提供了在治疗癌症例如局部晚期或转移性实体肿瘤中使用所述多特异性结合蛋白和药物制剂的剂量方案。

2、因此，一方面，本公开提供了一种ph为5.5至6.5的药物制剂，其包括组氨酸、聚山梨醇酯、糖或糖醇和包含抗体fc结构域、结合nkg2d的fab和结合her2的单链可变片段(scfv)的多特异性结合蛋白。

3、在某些实施方式中，所述药物制剂中组氨酸的浓度为10至25mm。在某些实施方式中，所述药物制剂中组氨酸的浓度为约20mm。

4、在某些实施方式中，所述糖或糖醇是二糖。在某些实施方式中，所述二糖是蔗糖。在某些实施方式中，所述糖或糖醇是衍生自单糖的糖醇。在某些实施方式中，所述衍生自单糖的糖醇是山梨糖醇。在某些实施方式中，所述药物制剂中所述糖或糖醇的浓度为200至300mm。在某些实施方式中，所述药物制剂中糖或糖醇的浓度为约250mm。

5、在某些实施方式中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯80。在某些实施方式中，所述药物制剂中聚山梨醇酯80的浓度为0.005％至0.05％。在某些实施方式中，所述药物制剂中聚山梨醇酯80的浓度为约0.01％。

6、在某些实施方式中，所述药物制剂中nacl如果存在的话，其浓度为约10mm或更低。在某些实施方式中，所述药物制剂中nacl如果存在的话，其浓度为约1mm或更低。

7、在某些实施方式中，所述药物制剂的ph为5.8至6.2。在某些实施方式中，所述药物制剂的ph为5.95至6.05。

8、在某些实施方式中，所述药物制剂中所述多特异性结合蛋白的浓度为约10至约20mg/ml。

9、在某些实施方式中，当通过体积排阻色谱法测定时，在50℃温育3周后超过94％的所述多特异性结合蛋白具有天然构象。在某些实施方式中，当通过体积排阻色谱法测定时，在50℃温育3周后少于4％的所述多特异性结合蛋白形成高分子量复合物。

10、另一方面，本公开提供了本文公开的药物制剂在治疗癌症中的用途。在某些实施方式中，所述药物制剂在使用之前用0.9％ nacl溶液稀释。

11、另一方面，本公开提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括在初始的4周治疗周期中，在第1天、第8天和第15天向有需要的受试者给药多特异性结合蛋白，其中所述多特异性结合蛋白包含：(a)结合nkg2d的fab；(b)结合her2的scfv；和(c)抗体fc结构域。

12、在某些实施方式中，所述方法还包括在所述初始治疗周期后，在一个或多个后续的4周治疗周期中向所述受试者给药所述多特异性结合蛋白，其中在每个后续治疗周期中所述多特异性结合蛋白在第1天和第15天给药。在某些实施方式中，每个所述药剂包含选自5.2×10-5mg/kg、1.6×10-4mg/kg、5.2×10-4mg/kg、1.6×10-3mg/kg、5.2×10-3mg/kg、1.6×10-2mg/kg、5.2×10-2mg/kg、1.6×10-1mg/kg、0.52mg/kg、1mg/kg、1.6mg/kg、5.2mg/kg、10mg/kg、20mg/kg和50mg/kg的量的所述多特异性结合蛋白。在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白通过静脉输注给药。

13、在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白被用作单一疗法。

14、在某些实施方式中，所述方法还包括向所述受试者给药抗pd-1抗体。在某些实施方式中，所述抗pd-1抗体是派姆单抗。在某些实施方式中，在所述初始治疗周期的第1天给药200mg的派姆单抗。在某些实施方式中，如果所述受试者接受一个或多个后续治疗周期，则在所述后续治疗周期中每三周一次给药200mg的派姆单抗。

15、在某些实施方式中，当通过免疫组织化学测定时，所述癌症是her2阳性的。在某些实施方式中，当通过免疫组织化学测定时，所述癌症中的her2水平被评分为至少1+。在某些实施方式中，所述癌症中的her2水平被评分为2+或3+。在某些实施方式中，所述癌症中的her2水平被评分为3+。

16、在某些实施方式中，所述癌症具有erbb2基因的扩增。在某些实施方式中，所述erbb2基因扩增通过荧光原位杂交来确定。在某些实施方式中，所述erbb2基因扩增通过dna测序来确定。

17、在某些实施方式中，所述癌症是实体肿瘤。在某些实施方式中，所述癌症是局部晚期或转移性实体肿瘤。在某些实施方式中，所述癌症选自胃癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌(nsclc)、头颈癌、胆道癌、成胶质细胞瘤、肉瘤、子宫癌、宫颈癌、卵巢癌、食道癌、皮肤鳞状细胞癌、前列腺癌、唾液腺癌、乳腺癌、胰腺癌和胆囊癌。在某些实施方式中，所述癌症是尿路上皮膀胱癌或转移性乳腺癌。

18、下述特点可以被并入到上文叙述的任一实施方式中：

19、在某些实施方式中，所述fab包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中(a)所述重链可变结构域包含分别由seq id nos：168、96和188的氨基酸序列表示的互补决定区1(cdr1)、互补决定区2(cdr2)和互补决定区3(cdr3)序列；并且(b)所述轻链可变结构域包含分别由seq id nos：99、100和101的氨基酸序列表示的cdr1、cdr2和cdr3序列。

20、在某些实施方式中，(a)所述重链可变结构域包含分别由seq id nos：168、96和169的氨基酸序列表示的cdr1、cdr2和cdr3序列；并且(b)所述轻链可变结构域包含分别由seq id nos：99、100和101的氨基酸序列表示的cdr1、cdr2和cdr3序列。在某些实施方式中，所述fab的重链可变结构域包含与seq id no：94至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含与seq id no：98至少90％同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述fab的重链可变结构域包含seq id no：94的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域包含seq id no：98的氨基酸序列。

21、在某些实施方式中，所述scfv包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中(a)所述重链可变结构域包含分别由seq id nos：115、116和117的氨基酸序列表示的cdr1、cdr2和cdr3序列；并且(b)所述轻链可变结构域包含分别由seq id nos：119、120和121的氨基酸序列表示的cdr1、cdr2和cdr3序列。在某些实施方式中，所述scfv的重链可变结构域包含与seq id no：195至少90％同一性的氨基酸序列，并且所述scfv的轻链可变结构域包含与seqid no：196至少90％同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述scfv的重链可变结构域包含seq id no：195的氨基酸序列，并且所述scfv的轻链可变结构域包含seq id no：196的氨基酸序列。

22、在某些实施方式中，所述scfv的轻链可变结构域通过柔性连接物连接到所述scfv的重链可变结构域。在某些实施方式中，所述柔性连接物包含seq id no：143的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述柔性连接物由seq id no：143的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，所述scfv的轻链可变结构域放置在所述scfv的重链可变结构域的n-端。

23、在某些实施方式中，所述scfv的重链可变结构域与所述scfv的轻链可变结构域形成二硫键。在某些实施方式中，所述二硫键在所述重链可变结构域的c44与所述轻链可变结构域的c100之间形成。

24、在某些实施方式中，所述scfv包含seq id no：139的氨基酸序列。

25、在某些实施方式中，所述抗体fc结构域包含连接到所述fab的第一抗体fc序列和连接到所述scfv的第二抗体fc序列。在某些实施方式中，所述第一抗体fc序列连接到所述fab的重链部分。在某些实施方式中，所述scfv通过包含ala-ser的铰链连接到所述第二抗体fc序列。

26、在某些实施方式中，所述第一和第二抗体fc序列各自包含人类igg1抗体的铰链和ch2结构域。在某些实施方式中，所述第一和第二抗体fc序列各自包含与野生型人类igg1抗体的第234-332位氨基酸至少90％同一性的氨基酸序列。

27、在某些实施方式中，所述第一和第二抗体fc序列包含不同的促进异二聚化的突变。在某些实施方式中，所述第一抗体fc序列是包含k360e和k409w替换的人类igg1 fc序列。在某些实施方式中，所述第二抗体fc序列是包含q347r、d399v和f405t替换的人类igg1fc序列。

28、在某些实施方式中，所述多特异性结合蛋白包含(a)包含seq id no：141的氨基酸序列的第一多肽；(b)包含seq id no：140的氨基酸序列的第二多肽；和(c)包含seq id no：142的氨基酸序列的第三多肽。

29、本公开的其他实施方式和详情呈现在下文中。