阿魏酰辅酶A6’-羟化酶表面突变体及其应用
技术特征：
1.一种阿魏酰辅酶a 6’-羟化酶突变体，其特征在于：主要是由seq id no.1所示的氨基酸序列发生氨基酸突变得到的，包括以下至少一种氨基酸突变：d102e、e163k、e190k、l196f、k199n；
2.一种编码权利要求1所述的阿魏酰辅酶a 6’-羟化酶突变体的基因。
3.一种重组质粒，其特征在于：它连接有权利要求2所述的基因；
4.一种合成香豆素类化合物的工程菌，其特征在于：包括宿主菌和转化到所述宿主菌的权利要求3所述的重组质粒；
5.根据权利要求4所述的工程菌，其特征在于：所述重组质粒中还同时连接有编码酪氨酸解氨酶、黄素还原酶、对羟基苯乙酸-3-羟化酶、咖啡酸甲氧基转移酶、对香豆酰-辅酶a连接酶和香豆素合成酶的基因；
6.根据权利要求5所述的工程菌，其特征在于：所述重组质粒中还同时连接有编码东莨菪素-糖基转移酶的基因；
7.根据权利要求5所述的工程菌，其特征在于：所述重组质粒中还同时连接有编码东莨菪素-8-羟化酶的基因；
8.根据权利要求7所述的工程菌，其特征在于：所述重组质粒中还同时连接有编码秦皮素-8-o-糖基转移酶的基因；
9.根据权利要求4所述的工程菌，其特征在于：所述重组质粒中还同时连接有编码酪氨酸解氨酶、黄素还原酶、对羟基苯乙酸-3-羟化酶、对香豆酰-辅酶a连接酶和香豆素合成酶的基因；
10.根据权利要求9所述的工程菌，其特征在于：所述重组质粒中还同时连接有编码东莨菪素-糖基转移酶的基因；
11.根据权利要求9所述的工程菌，其特征在于：所述重组质粒中还同时连接有编码秦皮乙素-6-o-糖基转移酶的基因；
12.一种香豆素类化合物的生物合成方法，包括：按照体积分数1%～10%的接种量，将权利要求4～11任一项所述的工程菌接种到发酵培养基中进行发酵培养，得到香豆素类化合物的步骤；
13.根据权利要求12所述的合成方法，其特征在于：还包括先向所述发酵培养基中添加中间化合物，再对所述工程菌进行发酵培养的步骤；
技术总结
本发明提供了阿魏酰辅酶A 6’‑羟化酶表面突变体及其应用。所述阿魏酰辅酶A 6’‑羟化酶表面突变体是由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列发生氨基酸突变得到的，包括以下至少一种氨基酸突变：D102E、E163K、E190K、L196F、K199N。本发明还提供了一种利用上述阿魏酰辅酶A 6’‑羟化酶突变体构建的合成香豆素类化合物的工程菌。所述阿魏酰辅酶A 6’‑羟化酶突变体具有较好的酶活性及稳定性，其酶活性提高了1.7倍以上，甚至可以提高至8.4倍；所以，上述工程菌能够实现东莨菪素、秦皮素、秦皮苷、东莨菪苷、秦皮乙素、秦皮甲素或菊苣苷等香豆素类化合物的高效生物合成，为香豆素类化合物的微生物合成提供了参考。
技术研发人员：孙新晓,袁其朋,谢冲,申晓林,王佳
受保护的技术使用者：北京化工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/11/18
技术研发人员：孙新晓,袁其朋,谢冲,申晓林,王佳
技术所有人：北京化工大学
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