抗菌肽在制备抗痤疮丙酸杆菌药物中的应用的制作方法

本发明涉及生物医药，尤其涉及一种抗菌肽在制备抗痤疮丙酸杆菌药物中的应用。

背景技术：

1、痤疮是一种常见的皮肤问题，尤其好发于青少年和年轻人。它不仅影响患者的外貌美观，还可能导致心理问题，如自卑、焦虑和抑郁等。因此，研究有效的痤疮治疗方法，可以显著改善患者的生活质量，增强自信心和社交能力。痤疮丙酸杆菌是一种亲油脂、厌氧的细菌，它在毛囊内的大量繁殖是痤疮发病的关键因素之一。当毛囊口堵塞、油脂增多时，痤疮丙酸杆菌就会迅速繁殖，并分解皮脂中的甘油三酯，产生游离脂肪酸。这些游离脂肪酸具有强烈的刺激性，能够刺激毛囊壁及其周围组织发生炎症反应，导致痤疮的形成。市场中常用的治疗药物包括抗生素、异维a酸等，克林霉素能够迅速减轻痤疮症状，但停药后容易复发，且长期使用容易产生耐药性，导致疗效下降；异维a酸在轻重度痤疮中有好的治疗效果，长期使用也会引起一系列的不良反应，如皮肤黏膜的干燥炎症、肝肾负担、骨骼肌肉影响、神经精神改变和生殖系统影响等。因此，有必要开发一类新型的抗痤疮药物。

2、多肽gky25(kasetty,gopinath,et al.)在人伤口中被鉴定，一种凝血酶的c-末端宿主防御肽。该肽表现出对革兰氏阴性细菌大肠杆菌和铜绿假单胞菌、革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌和真菌白色念珠菌的抗微生物活性。该肽引起铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌细胞膜的局部扰动和断裂，减轻小鼠模型中炎症因子表达，可能涉及与lps的结合和中和，产生后续toll样受体信号传导的抑制，或包括与cd14、tlrs或细胞内受体的相互作用，达到减轻炎症的效果。

3、本技术人在多肽数据库中筛选具有抗痤疮丙酸杆菌的候选多肽中意外发现，该已知多肽gky25对导致痤疮的痤疮丙酸杆菌有显著的抑制和抗菌作用，可以作为新型的抗痤疮药物候选药物。

技术实现思路

1、本发明的目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种抗菌肽在制备抗痤疮丙酸杆菌药物中的应用。该抗菌肽为已知多肽gky25，其对痤疮丙酸杆菌具有较强的杀菌能力，拓展了多肽gky25的新用途。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、本发明的第一目的是提供一种抗菌肽在制备抗痤疮丙酸杆菌药物中的应用，所述抗菌肽具体为如下a1)或a2)或a3)：

4、a1)氨基酸序列如seq id no.1所示；

5、a2)在a1)的n端或/和c端连接标签得到的融合蛋白质；

6、a3)为seq id no.1的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加若干氨基酸残基后得到的与seq id no.1同一性在90％或以上，且与a1具有相同功能的多肽。

7、为了使a1)中的多肽便于纯化，可在由序列表中seq id no.1所示的氨基酸序列组成的多肽的氨基末端或羧基末端连接上如下表所示的标签：poly-arg(rrrrr)、poly-his(hhhhhh)、flag(dykdddk)。

8、进一步的，所述痤疮丙酸杆菌包括寻常痤疮丙酸杆菌和耐药痤疮丙酸杆菌，所述寻常痤疮丙酸杆菌为atcc 11827，所述耐药痤疮丙酸杆菌为克林霉素或红霉素的耐药菌种。

9、进一步的，所述抗菌肽对atcc 11827的最小抑菌浓度为16μg/ml。

10、进一步的，所述抗菌肽对所述耐药痤疮丙酸杆菌的最小抑菌浓度为128μg/ml。

11、进一步的，所述抗菌肽能够抑制痤疮丙酸杆菌生物膜的活力和脂肪酶的产生。

12、本发明的第二目的是提供上述的抗菌肽相关的生物材料在制备抗痤疮丙酸杆菌药物中的应用，所述生物材料为下述b1)至b6)中的任一种：

13、b1)编码权利要求1所述抗菌肽的核酸分子；

14、b2)含有b1)所述核酸分子的表达盒；

15、b3)含有b1)所述核酸分子的重组载体；

16、b4)含有b1)所述核酸分子的重组微生物；

17、b5)含有b2)所述表达盒的重组微生物；

18、b6)含有b3)所述重组载体的重组微生物。

19、进一步的，所述核酸分子为如下1)或2)：

20、1)编码序列是序列表中seq id no.2的dna分子；

21、2)序列表中seq id no.2所示的dna分子。

22、进一步的，所述痤疮丙酸杆菌包括寻常痤疮丙酸杆菌和耐药痤疮丙酸杆菌，所述寻常痤疮丙酸杆菌为atcc 11827，所述耐药痤疮丙酸杆菌为克林霉素或红霉素的耐药菌种。

23、本发明的第三目的是提供包含氨基酸序列如seq id no.1所示的抗菌肽或其药学上可接受的盐的药物组合物在制备抗痤疮丙酸杆菌药物中的应用。

24、进一步的，所述的抗菌肽为唯一有效活性成分。

25、本发明的药物组合物优选局部给药，特别用于治疗皮肤，可以是软膏、乳膏、乳剂、香膏剂、粉末、凝胶、喷雾剂、洗液或混悬液形式。也可以是控释的微球或纳米球或者类脂或聚合物囊泡的混悬液、或聚合物贴片和水凝胶的形式。这种局部应用的组合物可以是无水形式、含水形式或乳液形式。

26、该药物组合物可以是含有羟丙甲纤维素和丙二醇的成分的水凝胶。

27、在本发明中所用的术语“同一性”是同一性是指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如ncbi主页网站的blast网页。例如，可在高级blast2.1中，通过使用blastp作为程序，将expect值设置为10，将所有filter设置为off，使用blosum62作为matrix，将gap existence cost，per residuegap cost和lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。

28、在本发明中所用的术语“具有相同功能的多肽”与本领域技术人员常规理解的含义相同或相似，均是指某一片段的氨基酸序列是完整蛋白或多肽的氨基酸序列的一部分，具备与完整蛋白或多肽相同或相似的功能或活性。本领域普通技术人员应当理解，在多肽的某些区域，例如非重要区域改变少数氨基酸残基基本上不会改变生物活性，例如，适当替换某些氨基酸得到的序列并不会影响其活性(可参见watson等，molecular biologyof thegene，第四版，1987，the benjamin/cummings pub.co.p224)。因此，本领域普通技术人员能够实施这种替换并且确保所得分子仍具有所需生物活性。

29、在本发明中所用的术语“寻常痤疮丙酸杆菌”意指痤疮丙酸杆菌与寻常痤疮相关。

30、在本发明中所用的术语“耐药痤疮丙酸杆菌”意指痤疮丙酸杆菌针对某些抗生素耐药。本发明中的耐药性是耐红霉素和耐克林霉素。

31、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

32、本发明提供了一种抗菌肽在制备抗痤疮丙酸杆菌药物中的应用，该抗菌肽为已知多肽gky25，该多肽对导致痤疮的痤疮丙酸杆菌有显著的抑制和抗菌作用，为痤疮的临床治疗提供一种新的先导候选分子。