通过重组微生物生物技术生产胶原蛋白和细菌胶原蛋白样蛋白的制作方法

1.多核苷酸，其编码氨基酸序列，所述氨基酸序列编码胶原蛋白或细菌胶原蛋白样蛋白，其包含n末端信号序列，所述n末端信号序列与选自seq id no:6–66的氨基酸序列中的一个至少≥90％相同。

2.权利要求1的多核苷酸，其中所述n末端信号序列与选自seq id no:6–66的氨基酸序列至少≥92％、≥94％、≥96％、≥97％、≥98％、≥99％或100％相同。

3.前述权利要求中任一项的多核苷酸，其中所述多核苷酸为可复制核苷酸序列，其编码来自酿脓链球菌(streptococcus pyogenes)的胶原蛋白样蛋白。

4.前述权利要求中任一项的多核苷酸，其中所述多核苷酸为可复制核苷酸序列，其编码来自酿脓链球菌的胶原蛋白样蛋白的胶原蛋白样结构域。

5.前述权利要求中任一项的多核苷酸，其中所述氨基酸序列编码细菌胶原蛋白样蛋白，其包含n末端信号序列，其中所述氨基酸序列与选自seq id no:67-127的氨基酸序列中的一个至少≥90％相同。

6.前述权利要求中任一项的多核苷酸，其中所述氨基酸序列编码细菌胶原蛋白样蛋白，其包含n末端信号序列，其中所述氨基酸序列与选自seq id no:90、seq id no:101、seqid no:104或seq id no:106的氨基酸序列中的一个至少≥90％相同。

7.载体，其包含权利要求1-5中任一项的多核苷酸。

8.微生物，其包含权利要求1-5中任一项的多核苷酸、或权利要求7的多肽、或权利要求6的载体。

9.权利要求8的微生物，其中所述微生物属于毕赤酵母属(pichia)、短芽孢杆菌属(brevibacillus)、芽孢杆菌属(bacillus)、埃希氏杆菌属(escherichia)或棒杆菌属(corynebacterium)，优选巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)、桥石短芽孢杆菌(brevibacillus choshinensis)或谷氨酸棒杆菌(corynebacterium glutamicum)。

10.权利要求9的微生物，其中权利要求1-5中任一项的多核苷酸以过表达形式存在。

11.权利要求8-10中任一项的微生物，其特征在于，所述微生物具有分泌胶原蛋白或细菌胶原蛋白样蛋白的能力。

12.在宿主中分泌胶原蛋白或细菌胶原蛋白样蛋白的发酵方法，其包括以下步骤：

13.权利要求12的方法，其特征在于，其为选自以下的方法：分批方法、补料分批方法、重复补料分批方法和连续方法。

14.权利要求12-13中任一项的方法，其特征在于，以至少100mg/l、或至少500mg/l、或至少1g/l、或至少5g/l的量获得所述胶原蛋白或细菌胶原蛋白样蛋白。

15.权利要求12-14中任一项的方法，其特征在于，所述胶原蛋白或细菌胶原蛋白样蛋白的纯度为至少30％、或至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少95％。

16.权利要求8-11中任一项的微生物用于发酵生产和分泌胶原蛋白和细菌胶原蛋白样蛋白的用途。