针对人TIM-3和人CD39的双特异性抗体和其用途的制作方法

本发明涉及对树突细胞、巨噬细胞、nk细胞、活化t细胞、癌细胞等表达的tim-3抗原和各种免疫细胞和非免疫细胞(内皮细胞、成纤维细胞等)表达的cd39抗原这两者具有结合性的异二聚体型的抗体或抗体衍生物，更具体而言，涉及对tim-3抗原和cd39抗原这两者具有结合性、具有增强对癌细胞的免疫活性的作用的抗体或抗体衍生物以及含有该抗体或抗体衍生物的癌治疗用和癌检查用的组合物和方法。

背景技术：

1、为了避免来自免疫系统的攻击，癌细胞除了利用调节性t细胞(regulatory tcell：treg)和骨髓来源抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell：mdsc)外，还积极利用免疫检查点分子的免疫抑制功能，逃避免疫系统。到目前为止，已经鉴定了各种免疫检查点分子及其配体。

2、免疫检查点抑制剂可以通过抑制该免疫检查点分子与其配体的结合、抑制免疫抑制信号的传递，由此解除被癌细胞的免疫检查点分子抑制的t细胞活化抑制，重新活化免疫功能，产生针对癌细胞的免疫作用。利用该功能，可以通过不同于以往所使用的抗癌药物、分子靶向药物的机制来治疗癌细胞。

3、到目前为止，作为免疫检查点抑制剂上市的药品，已知有作为pd-1/pd-l1抑制剂的纳武单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗(pembrolizumab)(抗pd-1抗体)和阿特珠单抗(atezolizumab)、度伐鲁单抗(durvalumab)(抗pd-l1抗体)以及作为ctla-4/b7(cd80/cd86)抑制剂的伊匹木单抗(ipilimumab)(抗ctla-4抗体)等。以这些抗体为主要成分的药品在若干种癌中单独使用或与其它抗癌剂联合使用时显示出高的有效性。

4、但是，据说以往的免疫检查点抑制剂的有效率约为5％～30％，特别地，已明确了患者的癌免疫状态的个体差异与免疫检查点抑制剂的效果有关。一般认为，该癌免疫状态的个体差异主要原因是癌细胞的基因异常状态，由患者的免疫体质(遗传背景，如hla类型等)、各种环境因素(如肠道细菌、吸烟、紫外线、饮食、压力等)共同决定的，存在无法通过这些现有的免疫检查点抑制剂来应对的患者。

5、作为免疫检查点分子之一，已知有tim-3(别名：havcr2)。tim-3是t细胞免疫球蛋白-含粘蛋白结构域分子超家族(t cell ig and mucin domain containing moleculesuperfamily)中的一种。已知tim-3是t细胞耐受(t cell tolerance)中的重要调节分子，在慢性病毒感染时的自身免疫和t细胞耗竭(t cell exhaustion)中起着极其重要的作用(非专利文献1)。

6、tim-3是一种参与调节天然免疫和获得性免疫应答的细胞表面受体，是通常认为为抑制性的分子，在巨噬细胞、nk细胞、th1细胞(1型t辅助细胞)、树突细胞、cd8+t细胞和其它淋巴细胞亚群中表达。tim-3与磷脂酰丝氨酸(ps)、ceacam1(carcinoembryonicantigen-related cell adhesion molecule 1，癌胚抗原相关细胞粘附分子1)、半乳糖凝集素-9、hmgb1(high mobility group box 1，高迁移率族蛋白1)等多种配体相互作用，认为tim-3的功能可能因细胞、所结合的配体而异。其中，tim-3-半乳糖凝集素-9途径负调节th1细胞(1型t辅助细胞)免疫，促进th1细胞的免疫耐受(非专利文献2)，因此预期通过抑制tim-3会增强天然免疫和获得性免疫。

7、此外，据报道，在获得性免疫应答中，tim-3阻断cd8+t细胞中t细胞受体(tcr)诱导性信号转导、抑制细胞因子的产生(非专利文献3、非专利文献4)。此外，据报道，与半乳糖凝集素-9的结合抑制t细胞应答并诱导抗原特异性t细胞凋亡(非专利文献3、非专利文献5)。

8、关于癌免疫，tim-3在肿瘤浸润t细胞中强烈表达，如上所述，被认为是表示t细胞耗竭状态的标志物之一。在同源移植小鼠模型中，确认到tim-3抗体与pd-1抗体的抗肿瘤效果具有协同效应。

9、tim-3也在t细胞以外的免疫细胞中表达，最近公开了，在树突细胞中表达的tim-3通过调节炎性小体(inflammasome)的活化而在树突细胞的功能调节中具有重要作用，从而可能负调节抗肿瘤免疫(非专利文献6)。

10、作为另一种认为发挥免疫检查点分子功能的物质，已知有cd39(别名：外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1，entpd1))。该cd39是一种跨膜蛋白，具有2个跨膜结构域和1个胞外结构域。具有与细胞外atp(extracellular atp；eatp)结合并将其水解为amp的酶活性(非专利文献7)。

11、cd39在各种免疫细胞和非免疫细胞(内皮细胞、成纤维细胞等)中表达，肿瘤内免疫细胞中cd39的表达增加。另一方面，感受到应激的细胞或即将死亡的细胞释放的atp对有效的天然免疫和获得性免疫应答提供重要的炎症信号，并且，主要通过cd39和cd73级联反应产生并释放到细胞外的eatp在细胞外水解为腺苷，由此产生的腺苷抑制免疫应答(非专利文献8)。

12、大量证据表明，即将死亡的肿瘤细胞释放atp是细胞死亡的免疫学特征，并促进抗肿瘤免疫应答(非专利文献9)。树突细胞中p2xr7和nlrp3炎性小体的活化和il-1β的产生是刺激抗肿瘤t细胞免疫所必需的，而cd39引起的atp耗竭已被证明使免疫原性化学疗法的抗肿瘤活性无效(非专利文献10)。

13、现有技术文献

14、非专利文献

15、非专利文献1：isabel sada-ovalle,et al.,j.immunol.,2012,189(12):5896-902

16、非专利文献2：sanchez-fueyo,a.,nat.immunol.2003nov；4(11):1093-101

17、非专利文献3：clayton,kl.,j.immunol.2014jan 15；192(2):782-91

18、非专利文献4：tomkowicz,b.,plos one.2015oct 22；10(10):e0140694

19、非专利文献5：zhu,c.,nat immunol.2005dec；6(12):1245-52

20、非专利文献6：dixon,ko.,nature volume 595,pages101-106(2021)

21、非专利文献7：kaczmarek,e.,j biol chem.1996dec 20；271(51):33116-22非专利文献8：moesta,ak.,nat.rev.immunol.20,pages739-755(2020)

22、非专利文献9：kroemer,g.,annu.rev.immunol.31,51-72(2013)

23、非专利文献10：mascanfroni,id.,nat.immunol.14,1054-1063(2013)

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、本发明的课题在于，提供具有更高效的免疫检查点抑制效果的抗体或抗体衍生物。更具体地，提供具有更高效的免疫检查点抑制效果、具有增强对癌细胞的免疫活性和癌治疗效果的抗体或抗体衍生物。

3、用于解决问题的方案

4、本发明的发明人们公开了：通过提供对tim-3抗原具有结合性且对cd39抗原具有结合性的异二聚体型的抗体或抗体衍生物，由此能够解决上述课题。更具体而言，本发明提供对tim-3抗原具有结合性且对cd39抗原具有结合性、具有增强对癌细胞的免疫活性的作用的异二聚体型的抗体或抗体衍生物。

5、更具体而言，本技术为了解决上述课题，提供以下方式：

6、[1]：一种异二聚体型的抗体或抗体衍生物，其为两种不同的半分子的组合，其具有：对tim-3抗原具有结合性的半分子和对cd39抗原具有结合性的半分子；

7、[2]：根据[1]所述的抗体或抗体衍生物，其具有增强对癌细胞的免疫活性的作用；

8、[3]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，对tim-3抗原具有结合性的半分子为含有选自由下述组成的组中的任意的重链/轻链的互补决定区的抗体的半分子或抗体衍生物的半分子：

9、(1-1)重链的互补决定区cdr1(syyms、序列号：1)、cdr2(tisnsggstyypdsvkd、序列号：2)和cdr3(dpyytnyvpmdy、序列号：3)、和

10、轻链的互补决定区cdr1(kasqyvdtyva、序列号：4)、cdr2(sastrht、序列号：5)和cdr3(aqysssplt、序列号：6)；

11、(1-2)重链的互补决定区cdr1(dyymd、序列号：9)、cdr2(yiypnkggtsynqkfkg、序列号：10)和cdr3(sgygnyytmdy、序列号：11)、和

12、轻链的互补决定区cdr1(kasqsvgnnva、序列号：12)、cdr2(yasnryt、序列号：13)和cdr3(qqhysspst、序列号：14)；

13、(1-3)重链的互补决定区cdr1(dyymd、序列号：17)、cdr2(yiypnkggtsynqkfkg、序列号：18)和cdr3(ggyysyysydy、序列号：19)、和

14、轻链的互补决定区cdr1(kasqsvgnnva、序列号：20)、cdr2(yasnryt、序列号：21)和cdr3(qqhysspyt、序列号：22)；

15、(1-4)重链的互补决定区cdr1(dyymd、序列号：25)、cdr2(yiypnkggtsynqkfkg、序列号：26)和cdr3(sgykayyamdy、序列号：27)、和

16、轻链的互补决定区cdr1(kasqsvgnnva、序列号：28)、cdr2(yasnryt、序列号：29)和cdr3(qqhysspyt、序列号：30)；

17、(1-5)重链的互补决定区cdr1(syyms、序列号：33)、cdr2(tisnsggstyypdsvkd、序列号：34)和cdr3(dpyytnyvpmdy、序列号：35)、和

18、轻链的互补决定区cdr1(kasenvgtyvs、序列号：36)、cdr2(gasnryt、序列号：37)和cdr3(gqsysyplt、序列号：38)；

19、[4]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，对cd39抗原具有结合性的半分子为含有选自由下述组成的组中的任意的重链/轻链的互补决定区的抗体的半分子或抗体衍生物的半分子：

20、(2-1)重链的互补决定区cdr1(gfsikdty、序列号：41)、cdr2(idpanvnt、序列号：42)和cdr3(alygydddayyfdy、序列号：43)、和

21、轻链的互补决定区cdr1(esvdnygisf、序列号：44)、cdr2(aas、序列号：45)和cdr3(qqskevpyt、序列号：46)；

22、(2-2)重链的互补决定区cdr1(gysftdyn、序列号：49)、cdr2(idpysggt、序列号：50)和cdr3(glygydddanyfdd、序列号：51)、和

23、轻链的互补决定区cdr1(ssvsy、序列号：52)、cdr2(ats、序列号：53)和cdr3(qqrssyplt、序列号：54)；

24、(2-3)重链的互补决定区cdr1(nygvh、序列号：57)、cdr2(vilrrgstdynaafms、序列号：58)和cdr3(tavvagdyfdy、序列号：59)、和

25、轻链的互补决定区cdr1(kasqnvgtnva、序列号：60)、cdr2(sasyrys、序列号：61)和cdr3(qqynsyplt、序列号：62)；

26、(2-4)重链的互补决定区cdr1(nygmn、序列号：65)、cdr2(wintytgeptyaddfkg、序列号：66)和cdr3(kgyygypnyyamdy、序列号：67)、和

27、轻链的互补决定区cdr1(kasqnvgtava、序列号：68)、cdr2(sasnryt、序列号：69)和cdr3(qqyssypit、序列号：70)；

28、(2-5)重链的互补决定区cdr1(sygvh、序列号：73)、cdr2(viwrrgstdynaafms、序列号：74)和cdr3(gistatswfay、序列号：75)、和

29、轻链的互补决定区cdr1(kasqnvgtnva、序列号：76)、cdr2(sasyrys、序列号：77)和cdr3(qqynsyplt、序列号：78)；

30、(2-6)重链的互补决定区cdr1(sygvh、序列号：81)、cdr2(viwrrgstdynaafms、序列号：82)和cdr3(vrgdamdy、序列号：83)、和

31、轻链的互补决定区cdr1(kasqnvgtnva、序列号：84)、cdr2(sasyrys、序列号：85)和cdr3(qqynsyplt、序列号：86)；

32、(2-7)重链的互补决定区cdr1(dygmh、序列号：89)、cdr2(yissgssiiyyadtvkg、序列号：90)和cdr3(kdypyamdy、序列号：91)、和

33、轻链的互补决定区cdr1(kasqnvgtnva、序列号：92)、cdr2(wasnrft、序列号：93)和cdr3(qqyssspyt、序列号：94)；

34、[5]：根据[3]所述的抗体或抗体衍生物，其中，对tim-3抗原具有结合性的半分子为(1-1)或(1-5)的半分子；

35、[6]：根据[4]所述的抗体或抗体衍生物，其中，对cd39抗原具有结合性的半分子为(2-1)、(2-3)～(2-7)中的任意半分子；

36、[7]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，对tim-3抗原具有结合性的半分子的重链可变区vh结构域的氨基酸序列选自由下述组成的组：

37、(vh-1-1)序列号7的氨基酸序列或在序列号7的氨基酸序列中的除cdr1(序列号1)、cdr2(序列号2)和cdr3(序列号3)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

38、(vh-1-2)序列号15的氨基酸序列或在序列号15的氨基酸序列中的除cdr1(序列号9)、cdr2(序列号10)和cdr3(序列号11)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

39、(vh-1-3)序列号23的氨基酸序列或在序列号23的氨基酸序列中的除cdr1(序列号17)、cdr2(序列号18)和cdr3(序列号19)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

40、(vh-1-4)序列号31的氨基酸序列或在序列号31的氨基酸序列中的除cdr1(序列号25)、cdr2(序列号26)和cdr3(序列号27)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、和

41、(vh-1-5)序列号39的氨基酸序列或在序列号39的氨基酸序列中的除cdr1(序列号33)、cdr2(序列号34)和cdr3(序列号35)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列；

42、[8]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，对tim-3抗原具有结合性的半分子的轻链可变区vl结构域的氨基酸序列选择由下述组成的组：

43、(vl-1-1)序列号8的氨基酸序列或在序列号8的氨基酸序列中的除cdr1(序列号4)、cdr2(序列号5)和cdr3(序列号6)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

44、(vl-1-2)序列号16的氨基酸序列或在序列号16的氨基酸序列中的除cdr1(序列号12)、cdr2(序列号13)和cdr3(序列号14)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

45、(vl-1-3)序列号24的氨基酸序列或在序列号24的氨基酸序列中的除cdr1(序列号20)、cdr2(序列号21)和cdr3(序列号22)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

46、(vl-1-4)序列号32的氨基酸序列或在序列号32的氨基酸序列中的除cdr1(序列号28)、cdr2(序列号29)和cdr3(序列号30)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、和

47、(vl-1-5)序列号40的氨基酸序列或在序列号40的氨基酸序列中的除cdr1(序列号36)、cdr2(序列号37)和cdr3(序列号38)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列；

48、[9]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，抗体衍生物的对tim-3抗原具有结合性的半分子选自构成单链fv抗体(scfv)的半分子的可变区为：

49、(1-1)将所述(vh-1-1)的重链可变区和所述(vl-1-1)的轻链可变区借助接头结合而成者、

50、(1-2)将所述(vh-1-2)的重链可变区和所述(vl-1-2)的轻链可变区借助接头结合而成者、

51、(1-3)将所述(vh-1-3)的重链可变区和所述(vl-1-3)的轻链可变区借助接头结合而成者、

52、(1-4)将所述(vh-1-4)的重链可变区和所述(vl-1-4)的轻链可变区借助接头结合而成者、和

53、(1-5)将所述(vh-1-5)的重链可变区和所述(vl-1-5)的轻链可变区借助接头结合而成者；

54、[10]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，对cd39抗原具有结合性的半分子的重链可变区vh结构域的氨基酸序列选自由下述组成的组：

55、(vh-2-1)序列号47的氨基酸序列或在序列号47的氨基酸序列中的除cdr1(序列号41)、cdr2(序列号42)和cdr3(序列号43)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

56、(vh-2-2)序列号55的氨基酸序列或在序列号55的氨基酸序列中的除cdr1(序列号49)、cdr2(序列号50)和cdr3(序列号51)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

57、(vh-2-3)序列号123的氨基酸序列或在序列号123的氨基酸序列中的除cdr1(序列号57)、cdr2(序列号58)和cdr3(序列号59)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

58、(vh-2-4)序列号71的氨基酸序列或在序列号71的氨基酸序列中的除cdr1(序列号65)、cdr2(序列号66)和cdr3(序列号67)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

59、(vh-2-5)序列号79的氨基酸序列或在序列号79的氨基酸序列中的除cdr1(序列号73)、cdr2(序列号74)和cdr3(序列号75)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、和

60、(vh-2-6)序列号87的氨基酸序列或在序列号87的氨基酸序列中的除cdr1(序列号81)、cdr2(序列号82)和cdr3(序列号83)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

61、(vh-2-7)序列号95的氨基酸序列或在序列号95的氨基酸序列中的除cdr1(序列号89)、cdr2(序列号90)和cdr3(序列号91)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列；

62、[11]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，对cd39抗原具有结合性的半分子的轻链可变区vl结构域的氨基酸序列选自由下述组成的组：

63、(vl-2-1)序列号48的氨基酸序列或在序列号48的氨基酸序列中的除cdr1(序列号44)、cdr2(序列号45)和cdr3(序列号46)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

64、(vl-2-2)序列号56的氨基酸序列或在序列号56的氨基酸序列中的除cdr1(序列号52)、cdr2(序列号53)和cdr3(序列号54)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

65、(vl-2-3)序列号124的氨基酸序列或在序列号124的氨基酸序列中的除cdr1(序列号60)、cdr2(序列号61)和cdr3(序列号62)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

66、(vl-2-4)序列号72的氨基酸序列或在序列号72的氨基酸序列中的除cdr1(序列号68)、cdr2(序列号69)和cdr3(序列号70)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

67、(vl-2-5)序列号80的氨基酸序列或在序列号80的氨基酸序列中的除cdr1(序列号76)、cdr2(序列号77)和cdr3(序列号78)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、和

68、(vl-2-6)序列号88的氨基酸序列或在序列号88的氨基酸序列中的除cdr1(序列号84)、cdr2(序列号85)和cdr3(序列号86)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列、

69、(vl-2-7)序列号96的氨基酸序列或在序列号96的氨基酸序列中的除cdr1(序列号92)、cdr2(序列号93)和cdr3(序列号94)以外的部分包含1个或数个氨基酸的置换(例如保守性置换)、插入或缺失的氨基酸序列；

70、[12]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，抗体衍生物的对cd39抗原具有结合性的半分子选自构成单链fv抗体(scfv)的半分子的可变区为：

71、(2-1)将所述(vh-2-1)的重链可变区和所述(vl-2-1)的轻链可变区借助接头结合而成者、

72、(2-2)将所述(vh-2-2)的重链可变区和所述(vl-2-2)的轻链可变区借助接头结合而成者、

73、(2-3)将所述(vh-2-3)的重链可变区和所述(vl-2-3)的轻链可变区借助接头结合而成者、

74、(2-4)将所述(vh-2-4)的重链可变区和所述(vl-2-4)的轻链可变区借助接头结合而成者、和

75、(2-5)将所述(vh-2-5)的重链可变区和所述(vl-2-5)的轻链可变区借助接头结合而成者、

76、(2-6)将所述(vh-2-6)的重链可变区和所述(vl-2-6)的轻链可变区借助接头结合而成者、

77、(2-7)将所述(vh-2-7)的重链可变区和所述(vl-2-7)的轻链可变区借助接头结合而成者；

78、[13]：根据[1]或[2]所述的抗体或抗体衍生物，其中，抗体衍生物选自抗体改变体或其功能性片段，所述抗体改变体或其功能性片段选自人源化抗体、嵌合抗体、单链fv抗体(scfv抗体)、fab、fab’、f(ab’)2、fc效应功能改变抗体、igg1lala、igg1_n297a、igg4_s228p；

79、[14]：根据[13]所述的抗体或抗体衍生物，其中，免疫活性的增强为t细胞的活化，所述t细胞的活化选自由除去免疫抑制信号、解除t细胞耗竭、使t细胞增殖、提高t细胞对癌细胞的细胞杀伤性、促进t细胞分泌细胞因子、活化t细胞的肿瘤浸润的亢进、促进树突细胞(dc)成熟、促进树突细胞介导的抗原特异性t细胞的活化和使树突细胞介导的t细胞的肿瘤细胞杀伤活性亢进组成的组；

80、[15]：根据[13]所述的抗体或抗体衍生物，其诱导对癌细胞的细胞杀伤性，但是不诱导对正常细胞的细胞杀伤性；

81、[16]：根据[13]所述的抗体或抗体衍生物，其中，癌细胞选自由血液癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、胰腺癌、肝癌组成的组；

82、[17]：一种用于治疗癌的药物组合物，其包含异二聚体型的抗体或抗体衍生物，所述异二聚体型的抗体或抗体衍生物为两种不同的半分子的组合，其具有：对tim-3抗原具有结合性的半分子和对cd39抗原具有结合性的半分子；

83、[18]：根据[17]所述的药物组合物，其中，癌选自由血液癌、黑素瘤、乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、胰腺癌、肝癌组成的组；

84、[19]：一种测定对癌细胞的细胞杀伤性的方法，其包括下述工序：

85、使从被检体采集的癌细胞在体外与异二聚体型的抗体或抗体衍生物接触的工序，所述异二聚体型的抗体或抗体衍生物为两种不同的半分子的组合，其具有：对tim-3抗原具有结合性的半分子和对cd39抗原具有结合性的半分子；和

86、在培养条件下，测定癌细胞的细胞存活率是否降低的工序或测定免疫活化物质的分泌是否亢进的工序；

87、[20]：根据[19]所述的测定对癌细胞的细胞杀伤性的方法，其中，在同一被检体的外周血淋巴细胞存在下，测定癌细胞的细胞存活率是否降低或源自外周血淋巴细胞的免疫细胞是否得到活化；

88、[21]：根据[19]或[20]所述的测定对癌细胞的细胞杀伤性的方法，其中，根据对从被检体采集的癌细胞的体外的细胞杀伤性来测定将异二聚体型的抗体或抗体衍生物给药于该被检体时对癌细胞的细胞杀伤性的亢进，所述异二聚体型的抗体或抗体衍生物为两种不同的半分子的组合，其具有：对tim-3抗原具有结合性的半分子和对cd39抗原具有结合性的半分子；

89、[22]：根据[19]或[20]所述的测定对癌细胞的细胞杀伤性的方法，其中，根据体外的免疫活化物质的分泌亢进来测定将异二聚体型的抗体或抗体衍生物给药于该被检体时对癌细胞的细胞杀伤性的亢进，所述异二聚体型的抗体或抗体衍生物为两种不同的半分子的组合，其具有：对tim-3抗原具有结合性的半分子和对cd39抗原具有结合性的半分子；

90、[23]：一种测定试剂盒，其用于在体外测定异二聚体型的抗体或抗体衍生物对从被检体采集的癌细胞的细胞杀伤性、免疫活化物质的分泌或免疫细胞的活化，所述测定试剂盒含有异二聚体型的抗体或抗体衍生物，所述异二聚体型的抗体或抗体衍生物为两种不同的半分子的组合，其具有：对tim-3抗原具有结合性的半分子和对cd39抗原具有结合性的半分子。

91、发明的效果

92、通过本发明得到的抗体或抗体衍生物(抗体等)对癌细胞或免疫细胞表达的tim-3抗原和各种免疫细胞和非免疫细胞(内皮细胞、成纤维细胞等)表达的cd39抗原这两者具有结合性，抑制tim-3抗原的功能且抑制cd39抗原的功能，结果是发挥增强对癌细胞的免疫活性的作用和癌治疗效果。