一种低湿条件下山梨酸钾诱导3D重组干眼模型的建立方法与流程
技术特征：
1.一种低湿条件下山梨酸钾诱导体外重组3d干眼模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）山梨酸钾诱导浓度筛选；（2）体外重组3d角膜上皮模型构建；（3）在低湿条件下通过模型表面给药进行体外重组3d干眼模型诱导构建；（4）体外重组3d干眼模型的有效性及稳定性验证。
2.根据权利要求1所述的一种低湿条件下山梨酸钾诱导体外重组3d干眼模型的构建方法，其特征在于，具体的步骤为：
3.根据权利要求2所述的一种低湿条件下山梨酸钾诱导体外重组3d干眼模型的构建方法，其特征在于，培养基ⅰ包含：基础成分为ksfm，添加成分为：1～10%胎牛血清、1～20μg/ml胰岛素、0.5～2%青霉素-链霉素、0.5～2%l-谷氨酰胺，百分比为体积百分比。
4.根据权利要求2所述的一种低湿条件下山梨酸钾诱导体外重组3d干眼模型的构建方法，其特征在于，培养基ⅱ包含：基础成分为ksfm，添加成分为：0.1～5%牛脑垂体提取物、1～20μg/ml胰岛素、1～10ng/ml氢化可的松、0.5～10ng/ml表皮细胞生长因子、0 .5～10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子、1～10μg/ml转铁蛋白、0.5～2%青霉素-链霉素，百分比为体积百分比。
5.根据权利要求2所述的一种低湿条件下山梨酸钾诱导体外重组3d干眼模型的构建方法，其特征在于，组织活力检测的方法为：取出模型开始洗涤程序，控制每个培养小室洗涤30s，用杜氏酸盐缓冲溶液洗模型15次，用无菌纱布或无菌棉棒擦拭；转移至含有300μlmtt工作液的24孔板中，避光孵育3 h，用移液器吸除mtt工作液，将干眼模型完全浸没至每孔含1.5ml异丙醇的24孔板，摇床震荡2h，得到异丙醇的浸提物，吸取200μl的到异丙醇浸提物到96孔板中于酶标仪上读取570 nm吸光度。
6.根据权利要求1或2所述的一种低湿条件下山梨酸钾诱导体外重组3d干眼模型的构建方法，其特征在于，体外重组3d干眼模型的有效性及稳定性验证，包括以下步骤：
技术总结
本发明属于组织工程技术领域，具体涉及一种低湿条件下山梨酸钾诱导3D重组干眼模型的建立方法，构建方法包括：山梨酸钾诱导浓度筛选；体外重组3D角膜上皮模型构建；在低湿条件下通过模型表面给药进行体外重组3D干眼模型诱导构建；验证体外重组3D干眼模型的有效性及稳定性。该方法有效地模拟人类干眼症状和环境，还可通过炎症因子、组织活力、组织学结构直观表征干眼模型的状态。该方法诱导的干眼模型操作方法简单，模型诱导过程耗时短，成本相较低廉，获得的模型稳定性好，更容易实现体系化与标准化，同样此模型使用人角膜上皮细胞可以避免种属差异，在评价药物或治疗方法，深入研究干眼症的发病机制及潜在的治疗策略方面提供一个新视角。
技术研发人员：王鑫玉,单风娟,邢志青,孙红,李芬,张甜甜,王杰,王红丽,程林,张平
受保护的技术使用者：济南磐升生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/11/14
技术研发人员：王鑫玉,单风娟,邢志青,孙红,李芬,张甜甜,王杰,王红丽,程林,张平
技术所有人：济南磐升生物技术有限公司
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