纳米抗体-药物加合物及其用途的制作方法

1.一种缀合物，其包含与免疫球蛋白结合的第一药剂和与细胞或病原体的表面上的靶标结合的第二药剂，其中所述第一药剂和所述第二药剂通过接头共价缀合。

2.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述第一药剂是包含能够与抗原结合的可变区的抗体片段。

3.根据权利要求2所述的缀合物，其中所述抗体片段包含重链可变区。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的缀合物，其中所述第一药剂是单结构域抗体片段。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的缀合物，其中由所述第一药剂结合的所述免疫球蛋白包含免疫球蛋白κ轻链或免疫球蛋白λ轻链。

6.根据权利要求5所述的缀合物，其中所述免疫球蛋白κ轻链是人免疫球蛋白κ轻链，并且所述免疫球蛋白λ轻链是人免疫球蛋白λ轻链。

7.根据权利要求6所述的缀合物，其中所述第一药剂与所述人免疫球蛋白κ轻链结合。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的缀合物，其中所述第二药剂包括小分子、肽、蛋白质、碳水化合物、脂质、核苷酸、核酸、寡核苷酸、适体或抗体。

9.根据权利要求8所述的缀合物，其中所述抗体是单结构域抗体。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的缀合物，其中所述第二药剂在施用于对象时具有治疗效果。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的缀合物，其中所述接头包括可切割接头或不可切割接头。

12.根据权利要求11所述的缀合物，其中所述接头包括可切割接头。

13.根据权利要求12所述的缀合物，其中所述可切割接头是肽接头、二硫化物接头或腙接头。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的缀合物，其中所述细胞是被病原体感染的细胞、癌细胞、转化细胞、健康细胞、作为对细胞应激的应答而正在经历或已经经历了表型变化的细胞。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的缀合物，其中所述病原体是病毒、细菌、寄生虫或真菌。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的缀合物，其中所述病原体是选自以下的病毒：流感病毒、冠状病毒、腺病毒、肠病毒、轮状病毒、诺如病毒、疱疹病毒、慢病毒、痘病毒、副粘病毒、弹状病毒、沙粒病毒、黄病毒、披膜病毒、汉坦病毒、肺炎病毒或埃博拉病毒。

17.根据权利要求16所述的缀合物，其中所述流感病毒是甲型流感病毒或乙型流感病毒。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的缀合物，其中所述第二药剂与流感病毒神经氨酸酶或流感病毒血凝素结合。

19.根据权利要求18所述的缀合物，其中所述第二药剂包括与流感病毒神经氨酸酶结合的小分子。

20.根据权利要求19所述的缀合物，其中所述第二药剂包括扎那米韦或其类似物。

21.根据权利要求20所述的缀合物，其中所述接头是三甘氨酸二苄基环辛炔(dbco)接头。

22.根据权利要求18所述的缀合物，其中所述第二药剂包括与流感病毒神经氨酸酶结合的抗体或抗体片段。

23.根据权利要求16所述的缀合物，其中所述冠状病毒是β冠状病毒。

24.根据权利要求23所述的缀合物，其中所述β冠状病毒是中东呼吸道综合征冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸系统综合征(sars)相关冠状病毒(sars-cov)-1或sars-cov-2。

25.根据权利要求24所述的缀合物，其中所述第二药剂与mers-cov刺突蛋白、sars-cov-1刺突蛋白或sars-cov-2刺突蛋白结合。

26.根据权利要求24所述的缀合物，其中所述第二药剂与mers-cov刺突蛋白受体结合结构域(rbd)、sars-cov-1刺突蛋白rbd或sars-cov-2刺突蛋白rbd结合。

27.根据权利要求16所述的缀合物，其中所述慢病毒是人免疫缺陷病毒(hiv)。

28.根据权利要求27所述的缀合物，其中所述第二药剂与hiv包膜糖蛋白gp120结合。

29.根据权利要求16所述的缀合物，其中所述肺炎病毒是人呼吸道合胞病毒(rsv)。

30.根据权利要求29所述的缀合物，其中所述第二药剂与rsv融合(f)蛋白结合。

31.根据权利要求1至15中任一项所述的缀合物，其中所述病原体是选自以下的细菌：巴斯德氏菌、葡萄球菌、链球菌、芽孢杆菌、棒杆菌、类白喉菌、李斯特氏菌、丹毒丝菌、梭菌、奈瑟氏菌、布兰汉氏菌、埃希氏菌、肠杆菌、变形杆菌、假单胞菌、克雷伯氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌、沙雷氏菌、不动杆菌、嗜血杆菌、布鲁氏菌、耶尔森氏菌、弗朗西丝氏菌、巴氏杆菌、弧菌、黄杆菌、假单胞菌、弯曲杆菌、拟杆菌、梭杆菌、鞘杆菌、链杆菌或军团菌。

32.根据权利要求1至15中任一项所述的缀合物，其中所述病原体是选自以下的寄生虫：疟原虫、锥体虫、弓形虫、利什曼原虫或隐孢子虫。

33.根据权利要求32所述的缀合物，其中所述疟原虫属是恶性疟原虫、三日疟原虫、间日疟原虫、诺氏疟原虫、卵形疟原虫柯氏亚种或卵形疟原虫沃氏亚种。

34.根据权利要求33所述的缀合物，其中所述第二药剂与疟原虫属表面蛋白结合。

35.根据权利要求34所述的缀合物，其中所述疟原虫属表面蛋白是裂殖子表面蛋白1(msp-1)。

36.根据权利要求35所述的缀合物，其中所述第二药剂是与msp-1结合的抗体，任选地其中所述抗体是纳米抗体。

37.根据权利要求36所述的缀合物，其中所述抗体包含表1中所列的抗体中的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。

38.根据权利要求37所述的缀合物，其中所述抗体包含seq id no:6-17中的任一者的氨基酸序列。

39.根据权利要求14所述的缀合物，其中所述癌细胞是血液癌细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、脑癌细胞、胃肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、膀胱癌细胞、胰腺癌细胞、卵巢癌细胞、睾丸癌细胞、前列腺癌细胞、子宫内膜癌细胞、肌肉癌细胞、骨癌细胞、神经内分泌癌细胞、结缔组织癌细胞、头颈癌细胞或皮肤癌细胞。

40.根据权利要求14或权利要求39所述的缀合物，其中所述第二药剂与肿瘤相关抗原结合。

41.根据权利要求40所述的缀合物，其中所述肿瘤相关抗原包括mhc i类多肽相关序列a(mica)蛋白、mhc i类多肽相关序列b(micb)蛋白、叶酸受体、纤连蛋白剪接变体、表皮生长因子受体(egfr)、人表皮生长因子受体2(her2)、肝细胞生长因子受体(hgfr)、血管内皮生长因子受体2(vegfr-2)、c-x-c趋化因子受体4型(cxcr4)、尿激酶纤溶酶原激活剂表面受体(upar)、卵泡刺激素受体(fshr)、上皮细胞粘附分子(epcam)、上皮钙粘蛋白(ecad)、癌胚抗原(cea)或间皮素(msln)。

42.根据权利要求41所述的缀合物，其中所述第二药剂是与mica结合的抗体，任选地其中所述抗体是纳米抗体。

43.根据权利要求42所述的缀合物，其中所述抗体包含表2中所列的抗体中的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。

44.根据权利要求43所述的缀合物，其中所述抗体包含seq id no:19-27中的任一者的氨基酸序列。

45.根据权利要求14所述的缀合物，其中所述细胞是癌性骨髓细胞或健康骨髓细胞。

46.根据权利要求45所述的缀合物，其中所述第二药剂与骨髓相关抗原结合。

47.根据权利要求46所述的缀合物，其中所述骨髓相关抗原是分化簇抗原45(cd45)。

48.根据权利要求14所述的缀合物，其中所述细胞是癌性免疫细胞或健康免疫细胞。

49.根据权利要求48所述的缀合物，其中所述细胞是癌性t细胞或b细胞、或健康t细胞或b细胞。

50.根据权利要求48或权利要求49所述的缀合物，其中所述第二药剂与免疫细胞相关抗原结合。

51.根据权利要求50所述的缀合物，其中所述免疫细胞相关抗原是分化簇抗原4(cd4)、分化簇抗原8(cd8)、t细胞受体(tcr)或b细胞受体(bcr)。

52.根据权利要求1至51中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物在施用于对象时提供治疗效果。

53.根据权利要求1至51中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物在施用于对象时增强表达可结晶片段(fc)受体的一种或多种免疫细胞与所述细胞或病原体之间的缔合。

54.根据权利要求1至52中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物在施用于对象时引起对所述细胞或病原体的杀伤。

55.根据权利要求1至54中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物在施用于对象时引起所述细胞或病原体的失活。

56.根据权利要求52至55中任一项所述的缀合物，其中所述对象是哺乳动物。

57.根据权利要求52至56中任一项所述的缀合物，其中所述对象是人。

58.一种组合物，其包含根据权利要求1至57中任一项所述的缀合物。

59.根据权利要求58所述的组合物，其中所述组合物进一步包含药理学上可接受的赋形剂。

60.一种用于增强对象对于细胞或病原体的免疫应答的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的根据权利要求1至57中任一项所述的缀合物或根据权利要求58或权利要求59所述的组合物。

61.根据权利要求60所述的方法，其中所述细胞是被病原体感染的细胞、癌细胞、转化细胞、健康细胞、作为对细胞应激的应答而正在经历或已经经历了表型变化的细胞。

62.根据权利要求60或权利要求61所述的方法，其中所述病原体是病毒、细菌、寄生虫或真菌。

63.根据权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述细胞是所述对象的细胞。

64.根据权利要求60至63中任一项所述的方法，其中所述病原体是选自以下的病毒：流感病毒、冠状病毒、腺病毒、肠病毒、轮状病毒、诺如病毒、疱疹病毒、慢病毒、痘病毒、副粘病毒、弹状病毒、沙粒病毒、黄病毒、披膜病毒、汉坦病毒、肺炎病毒或埃博拉病毒。

65.根据权利要求64所述的方法，其中所述病毒是甲型流感病毒或乙型流感病毒。

66.根据权利要求64所述的方法，其中所述病毒是中东呼吸道综合征冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸系统综合征(sars)相关冠状病毒(sars-cov)-1或sars-cov-2。

67.根据权利要求64所述的方法，其中所述病毒是人免疫缺陷病毒(hiv)。

68.根据权利要求64所述的方法，其中所述病毒是人呼吸道合胞病毒(rsv)。

69.根据权利要求60至63中任一项所述的方法，其中所述病原体是选自以下的细菌：巴斯德氏菌、葡萄球菌、链球菌、芽孢杆菌、棒杆菌、类白喉菌、李斯特氏菌、丹毒丝菌、梭菌、奈瑟氏菌、布兰汉氏菌、埃希氏菌、肠杆菌、变形杆菌、假单胞菌、克雷伯氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌、沙雷氏菌、不动杆菌、嗜血杆菌、布鲁氏菌、耶尔森氏菌、弗朗西丝氏菌、巴氏杆菌、霍乱弧菌、黄杆菌、假单胞菌、弯曲杆菌、拟杆菌、梭杆菌、鞘杆菌、链杆菌或军团菌。

70.根据权利要求60至63中任一项所述的方法，其中所述病原体是选自以下的寄生虫：疟原虫、锥体虫、弓形虫、利什曼原虫或隐孢子虫。

71.根据权利要求70所述的方法，其中所述寄生虫是恶性疟原虫、三日疟原虫、间日疟原虫、诺氏疟原虫、卵形疟原虫柯氏亚种或卵形疟原虫沃氏亚种。

72.根据权利要求61至63中任一项所述的方法，其中所述癌细胞是血液癌细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、脑癌细胞、胃肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、膀胱癌细胞、胰腺癌细胞、卵巢癌细胞、睾丸癌细胞、前列腺癌细胞、子宫内膜癌细胞、肌肉癌细胞、骨癌细胞、神经内分泌癌细胞、结缔组织癌细胞、头颈癌细胞或皮肤癌细胞。

73.根据权利要求60至63中任一项所述的方法，其中所述细胞是癌性骨髓细胞或健康骨髓细胞。

74.根据权利要求60至63中任一项所述的方法，其中所述细胞是癌性免疫细胞或健康免疫细胞。

75.根据权利要求74所述的方法，其中所述细胞是癌性t细胞或b细胞、或健康t细胞或b细胞。

76.根据权利要求60至75中任一项所述的方法，其中所述免疫应答包括先天免疫应答。

77.根据权利要求60至70中任一项所述的方法，其中所述缀合物与所述细胞或病原体结合并且与所述对象的免疫球蛋白结合，其中所述免疫球蛋白进一步与所述对象的免疫细胞结合，所述免疫细胞在其表面上表达可结晶片段(fc)受体。

78.根据权利要求77所述的方法，其中所述对象的所述免疫球蛋白包含免疫球蛋白κ轻链或免疫球蛋白λ轻链。

79.根据权利要求78所述的方法，其中所述对象的所述免疫球蛋白包含免疫球蛋白κ轻链。

80.根据权利要求77至79中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞是巨噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞或肥大细胞。

81.根据权利要求77至80中任一项所述的方法，其中所述施用诱导所述免疫细胞产生一种或多种细胞因子或趋化因子。

82.根据权利要求81所述的方法，其中所述一种或多种细胞因子或趋化因子是促炎细胞因子或趋化因子。

83.根据权利要求77至82中任一项所述的方法，其中所述施用诱导所述免疫细胞对所述细胞或病原体的吞噬作用。

84.根据权利要求77至82中任一项所述的方法，其中所述施用引起对所述细胞或病原体的杀伤。

85.根据权利要求60至82中任一项所述的方法，其中所述施用引起所述细胞或病原体的失活。

86.根据权利要求60至85中任一项所述的方法，其中所述对象是具有病毒感染或有病毒感染的风险的对象。

87.根据权利要求60至85中任一项所述的方法，其中所述对象是患有癌症或有罹患癌症的风险的对象。

88.根据权利要求87所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。

89.根据权利要求60至88中任一项所述的方法，其中所述对象是哺乳动物。

90.根据权利要求60至89中任一项所述的方法，其中所述对象是人。

91.根据权利要求90所述的方法，其中所述对象是人类新生儿、人类婴儿、成年人或老年人。

92.根据权利要求60至89中任一项所述的方法，其中所述对象是伴侣动物、研究动物或驯养动物。

93.根据权利要求60至92中任一项所述的方法，其中所述施用是静脉内的、肌内的、皮内的、皮下的或吸入的。

94.根据权利要求60至93中任一项所述的方法，其中所述施用发生多于一次。

95.根据权利要求60至94中任一项所述的方法，其中所述施用是预防性的。

96.一种用于治疗有需要的对象的疾病或降低所述对象患有疾病的风险的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的根据权利要求1至57中任一项所述的缀合物或根据权利要求58或权利要求59所述的组合物。

97.根据权利要求96所述的方法，其中所述疾病是由病毒、细菌、寄生虫、真菌或癌症引起的疾病。

98.根据权利要求97所述的方法，其中所述病毒是流感病毒、冠状病毒、腺病毒、肠病毒、轮状病毒、诺如病毒、疱疹病毒、慢病毒、痘病毒、副粘病毒、弹状病毒、沙粒病毒、黄病毒、披膜病毒、汉坦病毒、肺炎病毒或埃博拉病毒。

99.根据权利要求97或权利要求98所述的方法，其中所述病毒是甲型流感病毒或乙型流感病毒。

100.根据权利要求97或权利要求98所述的方法，其中所述病毒是中东呼吸道综合征冠状病毒(mers-cov)、严重急性呼吸系统综合征(sars)相关冠状病毒(sars-cov)-1或sars-cov-2。

101.根据权利要求97或权利要求98所述的方法，其中所述病毒是人免疫缺陷病毒(hiv)。

102.根据权利要求97或权利要求98所述的方法，其中所述病毒是人呼吸道合胞病毒(rsv)。

103.根据权利要求97所述的方法，其中所述细菌是巴斯德氏菌、葡萄球菌、链球菌、芽孢杆菌、棒杆菌、类白喉菌、李斯特氏菌、丹毒丝菌、梭菌、奈瑟氏菌、布兰汉氏菌、埃希氏菌、肠杆菌、变形杆菌、假单胞菌、克雷伯氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌、沙雷氏菌、不动杆菌、嗜血杆菌、布鲁氏菌、耶尔森氏菌、弗朗西丝氏菌、巴氏杆菌、霍乱弧菌、黄杆菌、假单胞菌、弯曲杆菌、拟杆菌、梭杆菌、鞘杆菌、链杆菌或军团菌。

104.根据权利要求97所述的方法，其中所述寄生虫是疟原虫、锥体虫、弓形虫、利什曼原虫或隐孢子虫。

105.根据权利要求104所述的方法，其中所述寄生虫是恶性疟原虫、三日疟原虫、间日疟原虫、诺氏疟原虫、卵形疟原虫柯氏亚种或卵形疟原虫沃氏亚种。

106.根据权利要求97所述的方法，其中所述癌症是血液癌、肺癌、乳腺癌、脑癌、胃肠癌、肝癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、睾丸癌、前列腺癌、子宫内膜癌、肌肉癌、骨癌、神经内分泌癌、结缔组织癌、头颈癌或皮肤癌。

107.根据权利要求97或权利要求106所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。

108.根据权利要求96至107中任一项所述的方法，其中所述对象是哺乳动物。

109.根据权利要求96至108中任一项所述的方法，其中所述对象是人。

110.根据权利要求109所述的方法，其中所述对象是人类新生儿、人类婴儿、成年人或老年人。

111.根据权利要求96至108中任一项所述的方法，其中所述对象是伴侣动物、研究动物或驯养动物。

112.根据权利要求96至111中任一项所述的方法，其中所述施用是静脉内的、肌内的、皮内的、皮下的或吸入的。

113.根据权利要求96至112中任一项所述的方法，其中所述施用发生多于一次。

114.根据权利要求96至113中任一项所述的方法，其中所述施用是预防性的。

115.一种抗体，其包含表1中所列的抗体中的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。

116.根据权利要求115所述的抗体，其中所述抗体包含seq id no:6-17中的任一者的氨基酸序列。

117.一种抗体，其包含表2中所列的抗体中的任一种抗体的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3。

118.根据权利要求117所述的抗体，其中所述抗体包含seq id no:19-27中的任一者的氨基酸序列。

119.一种抗体，其包含seq id no:38的氨基酸序列。