一种调控采后柿果实软化的产品、方法及用途

本发明属于植物分子育种，具体涉及一种采后柿果实软化的产品、方法及用途。

背景技术：

1、柿(diospyroskaki)是原产于我国的柿科柿属多年生落叶果树，栽培历史悠久、文化底蕴丰厚。其果实风味独特、营养丰富，深受消费者喜爱。据联合国粮农组织统计，我国每年柿产量超过300万吨，约占世界总产量的70％，是我国一大特色经济果树。

2、柿树适应性强、易存活，除北部黑龙江、内蒙古等严寒地区外，大部分省市都有种植。然而，全国各产区柿果实采收期多集中在9～11月，采后柿果实容易后熟软化，往往造成较大的经济损失与资源浪费。因此，研究柿果实软化的调控因子，对延长柿果实市场供应周期具有重要的产业意义。

3、国内外研究表明，细胞壁代谢是果实软化的直接原因。柿果实中，前期已鉴定出多个与果实软化相关的细胞壁代谢基因及转录因子。研究发现，转录因子dkerf8/16/19可以激活dkxth9启动子，参与调控脱涩处理引起的柿果实软化过程。另外，dknac9转录因子可以和dkerf8/16形成蛋白复合体，协同调控dkegase1的表达，从而影响柿果实软化。

4、赤霉素是与果实成熟密切相关的一种重要植物激素，对柿果实软化具有抑制作用。della是一类n端具有保守della结构域的gras家族转录因子，是赤霉素信号通路的关键组分。但它是否参与赤霉素对果实软化的调控作用尚不清楚。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供了一种调控采后柿果实软化的产品、方法及用途，利用柿果实基因组数据库信息结合基因表达量分析，发现了两个della基因dkdella1、dkdella2在采后柿果实中高表达；双荧光素酶试验结果表明，两个della基因可与转录因子dknac9协同增强柿果实软化靶基因dkegase1启动子活性，进而参与采后柿果实的软化；通过瞬时表达技术上调两个基因在果实中的表达水平，能够诱导细胞壁代谢基因dkegase1的表达，促进细胞壁降解，从而加速果实软化。

2、一方面，本发明提供了一种调控采后柿果实软化的产品，包括基因过表达载体，所述基因过表达载体具有如seq id no.1和/或seq id no.2所示的核苷酸序列。

3、另一方面，本发明提供了一种调控采后柿果实软化的方法，采用如上所述的产品进行采后柿果实软化调控。

4、进一步地，所述方法包括在采后柿果实中，对其采用含有基因过表达载体的试剂进行处理，所述基因过表达载体具有如seq id no.1和/或seq id no.2所示的核苷酸序列。

5、再一方面，本发明提供了一种基因用于制备促进果实软化的试剂的用途，所述基因包括dkdella1和dkdella2，所述基因具有如seq id no.3和/或seq id no.4所示的核苷酸序列。

6、赤霉素处理是一种有效的果实保鲜技术。采收后对柿果实喷施300mg/l的赤霉素溶液，可以明显延缓其软化进程。研究发现，在采后赤霉素处理下，柿果实硬度下降缓慢，果实软化延迟。考虑到della是赤霉素信号传递的关键组分，可能参与了赤霉素对柿果实软化的调控作用。

7、本发明利用柿果实基因组数据库信息，共找到5个编码della蛋白的柿della基因。采用采后柿果实样品，考察5个della基因在采后柿果实样品中的表达水平差异，发现dkdella1和dkdella2这两个della基因的表达水平明显高于其他基因，推测它们可能发挥了主要作用。

8、本发明所提供的两个della基因来源于柿(diospyroskakicv.恭城水柿)，是gras转录因子家族中的成员，dkdella1核苷酸序列全长1617bp，dkdella2核苷酸序列全长1725bp。

9、进一步地，dkdella1、dkdella2与dknac9协同增强果实软化靶基因dkegase1启动子活性，促进果实的软化。

10、细胞壁降解是果实软化的直接原因，上调细胞壁代谢相关基因dkegase1等的表达可以加速细胞壁降解，从而加速果实软化。利用双荧光素酶实验分析发现，dkdella1和dkdella2都与dknac9存在协同增效作用，能够增强dknac9对细胞壁降解基因dkegase1启动子的激活作用，从而促进细胞壁降解，影响果实软化。

11、进一步地，通过构建所述基因的过表达载体来促进果实软化。

12、将dkdella1和dkdella2分别过量表达于柿果实中，结果发现dkegase1的表达水平受到上调，确实可显著降低细胞壁物质含量，进而影响果实软化。

13、进一步地，所述基因的过表达载体具有如seq id no.1和/或seq id no.2所示的核苷酸序列。

14、进一步地，所述dkdella1和dkdella2基因通过促进果实细胞壁代谢调控果实软化。

15、进一步地，所述果实为柿子。

16、再一方面，本发明提供了一种基因用于制备促进果实细胞壁代谢的试剂的用途，所述基因包括dkdella1和dkdella2，所述基因具有如seq id no.3和/或seq id no.4所示的核苷酸序列。

17、本发明具有以下有益效果：

18、1.本发明克隆得到的两个della基因dkdella1和dkdella2，可以与dknac9基因协同增强果实软化靶基因dkegase1启动子活性，促进果实的软化；

19、2.通过在柿果实中瞬时过表达dkdella1和dkdella2可以提高dkegase1的表达，促进柿果实中的细胞壁降解，导致果实软化；

20、3.通过分子生物技术手段研究两个della基因在促进柿果实软化方面的调控机理，为培育果实软化程度较高的柿子提供理论依据。

1.一种调控采后柿果实软化的产品，其特征在于，包括基因过表达载体，所述基因过表达载体具有如seq id no.1和/或seq id no.2所示的核苷酸序列。

2.一种调控采后柿果实软化的方法，其特征在于，采用如权利要求1所述的产品进行采后柿果实软化调控。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，包括在采后柿果实中，对其采用含有基因过表达载体的试剂进行处理，所述基因过表达载体具有如seq id no.1和/或seq id no.2所示的核苷酸序列。

4.一种基因用于制备促进果实软化的试剂的用途，其特征在于，所述基因包括dkdella1和dkdella2，所述基因具有如seq id no.3和/或seq id no.4所示的核苷酸序列。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，dkdella1、dkdella2与dknac9协同增强果实软化靶基因dkegase1启动子活性，促进果实的软化。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，通过构建所述基因的过表达载体来促进果实软化。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述基因的过表达载体具有如seq id no.1和/或seq id no.2所示的核苷酸序列。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述两个della基因通过促进果实细胞壁代谢调控果实软化。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述果实为柿子。

10.一种基因用于制备促进果实细胞壁代谢的试剂的用途，其特征在于，所述基因包括dkdella1和dkdella2，所述基因具有如seq id no.3和/或seq id no.4所示的核苷酸序列。