一种系统性淀粉样变模型的建立方法与应用

本发明属于医药，具体地，涉及一种系统性淀粉样变模型的建立方法与应用。

背景技术：

1、淀粉样变是由多种因素引起淀粉样前体蛋白错误折叠并逐渐聚集形成不溶性纤维，沉积于人体的组织器官之间使其功能逐渐衰竭的一种慢性临床综合征。该疾病根据病变部位可以分为系统性（多器官受累）和局限性（仅某一器官受累）。

2、肾脏作为众多物质代谢的重要场所，同时也是淀粉样变最常出现并受累的脏器之一。肾脏淀粉样变发病多见于中老年患者，主要临床表现为蛋白尿或肾病综合征，最终可发展为终末期肾病。其中，位于肾小球的系膜区内含量丰富的蛋白成分，是淀粉样物质最易沉积的部位。系膜区由系膜细胞及其产生的系膜基质构成，具有支持、收缩、吞噬、分泌等多种功能。肾小球淀粉样变最早表现为系膜细胞损伤、系膜基质增厚等，光镜和电镜观察肾小球系膜区均可见淀粉样沉积物。

3、肝脏淀粉样变疾病是由于错误折叠的蛋白质在肝脏中积聚，从而引起肝细胞、组织炎症浸润和随后的肝功能衰竭等一系列的肝损伤。淀粉样蛋白a（aa）是一种由肝脏产生的急性期反应物，血清淀粉样蛋白a（saa）为其前体。saa是一种肝脏中典型的淀粉样蛋白，在炎症的启动和维持中起关键作用。saa在炎症部位诱导中性粒细胞增多，并诱导多种炎症细胞因子的分泌，包括tnf-α、il-6等。saa表达的改变在肝淀粉样蛋白沉积中起着致病作用。saa的持续升高是发生肝脏淀粉样变的先决表现。

4、除了最常见的肝、肾淀粉样变之外，心、脾、血管和皮肤也是系统性淀粉样病变的好发器官或组织。淀粉样蛋白在心脏组织中沉积会引起左心室肥厚，心脏舒张受损及心室僵硬度增加，导致心脏收缩功能障碍，当疾病进展到终末期，患者左室射血分数显著下降，表现为心衰；在脾脏中，淀粉样蛋白常在脾白髓和血管沉积，从而导致脾肿大、钙化，脾淀粉样变初期通常为良性病变，长期发展会增加脾出血、破裂的风险。

5、鸡蛋清溶菌酶是目前研究淀粉样变最广泛的蛋白质之一，在体外条件下孵育会形成淀粉样蛋白原纤维。此外，鸡蛋清溶菌酶与人溶菌酶的结构相似，具有高度的同源性，这使得鸡蛋清溶菌酶经常被作为体内、外研究淀粉样变的模型蛋白。

6、目前尚未查见淀粉样变溶菌酶（lyso-6）在体内、外诱导多种器官及细胞发生继发性系统性淀粉样变的报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的技术问题，提供一种系统性淀粉样变生物模型的建立方法，并同时提供其应用。

2、为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：

3、本发明第一方面提供了一种系统性淀粉样变模型的建立方法，先用药物刺激小鼠产生炎症，期间尾静脉注射淀粉样变溶菌酶lyso-6，得到系统性淀粉样变模型。

4、作为本发明的进一步改进，刺激小鼠产生炎症的方法为：连续13-15天背部皮下给予0.15-0.25ml浓度为1.5-2.5%的agno3，刺激炎症产生。

5、作为本发明的进一步改进，分别在第7-9天和第13-15天经尾静脉注射0.05-0.15ml终浓度为0.5-1.5mg/ml的淀粉样变溶菌酶lyso-6。

6、作为本发明的进一步改进，小鼠选自7周龄雄性c57bl/6小鼠。

7、作为本发明的进一步改进，淀粉样病变组织包括心脏组织、肝脏组织、脾脏组织、肾脏组织、血管和皮肤组织。

8、作为本发明的进一步改进，系统性淀粉样变模型的建立完成时间为48-52天。

9、作为本发明的进一步改进，淀粉样变溶菌酶lyso-6的制备方法如下：

10、s1：适量鸡蛋清溶菌酶粉末加入ph为2的盐酸溶液，终浓度是1mm，4℃静置8~10h，使其充分溶解，待完全溶解后，用0.22～0.45μm滤膜过滤；

11、s2：将溶菌酶孵育液放置于恒温振荡器中，振荡器设置条件为65±2℃，50 rpm，连续孵育6天，并于3~5℃保存。

12、作为本发明的进一步改进，将7周龄雄性c57bl/6小鼠适应性饲养一周，第8天开始，连续14天背部皮下给予0.20ml浓度为2%的agno3，刺激炎症产生，并分别在第8天和第15天经尾静脉注射一次0.10ml终浓度为1mg/ml的淀粉样变溶菌酶lyso-6，得到系统性淀粉样变模型，于第50天对小鼠组织进行取材。

13、本发明第二方面提供了一种所述方法获得的系统性淀粉样变模型。

14、本发明第三方面提供了一种所述方法获得的系统性淀粉样变模型在筛选治疗或预防淀粉样变药物中的应用。

15、采用上述技术方案所产生的有益效果在于：

16、本发明经小鼠尾静脉注射淀粉样变溶菌酶，诱导小鼠组织器官发生淀粉样变，得到系统性淀粉样变模型。本发明得到的系统性淀粉样变模型可以模拟体内系统性淀粉样变的病理状态，用于淀粉样变防治药物的活性筛选，在淀粉样变的治疗和预防方面有良好的应用前景。

1.一种系统性淀粉样变模型的建立方法，其特征在于，先用药物刺激小鼠产生炎症，期间尾静脉注射淀粉样变溶菌酶lyso-6，得到系统性淀粉样变模型。

2.根据权利要求1所述的一种系统性淀粉样变模型的建立方法，其特征在于，刺激小鼠产生炎症的方法为：连续13-15天背部皮下给予0.15-0.25ml浓度为1.5-2.5%的agno3，刺激炎症产生。

3.根据权利要求1所述的一种系统性淀粉样变模型的建立方法，其特征在于，分别在第7-9天和第13-15天经尾静脉注射0.05-0.15ml终浓度为0.5-1.5mg/ml的淀粉样变溶菌酶lyso-6。

4.根据权利要求1所述的一种系统性淀粉样变模型的建立方法，其特征在于，小鼠选自7周龄雄性c57bl/6小鼠。

5.根据权利要求1所述的一种系统性淀粉样变模型的建立方法，其特征在于，淀粉样病变组织包括心脏组织、肝脏组织、脾脏组织、肾脏组织、血管和皮肤组织。

6.根据权利要求1所述的一种系统性淀粉样变模型的建立方法，其特征在于，系统性淀粉样变模型的建立完成时间为48-52天。

7.根据权利要求1所述的一种系统性淀粉样变模型的建立方法，其特征在于，淀粉样变溶菌酶lyso-6的制备方法如下：

8.根据权利要求1所述的一种系统性淀粉样变模型的建立方法，其特征在于，将7周龄雄性c57bl/6小鼠适应性饲养一周，第8天开始，连续14天背部皮下给予0.20ml浓度为2%的agno3，刺激炎症产生，并分别在第8天和第15天经尾静脉注射一次0.10ml终浓度为1mg/ml的淀粉样变溶菌酶lyso-6，得到系统性淀粉样变模型，于第50天对小鼠组织进行取材。

9.一种如权利要求1~8任一项所述方法获得的系统性淀粉样变模型。

10.一种如权利要求1~8任一项所述方法获得的系统性淀粉样变模型在筛选治疗或预防淀粉样变药物中的应用。