一种ABO血型系统中的新型O等位基因的制作方法

本发明属于基因诊断制品，具体涉及一种abo血型系统中的新型o等位基因。

背景技术：

1、血型等位基因的变异会引起编码物质改变，导致抗原减弱形成血型亚型。现代输血遵循同型输注原则，因血型亚型鉴定错误而造成的不相容输注会引起溶血性输血反应，易发生弥散性血管内凝血、肾衰竭甚至死亡。因此，血型亚型在安全输血、器官移植、胎母免疫性溶血病的预测与防治等方面具有十分重要的作用。

2、血型抗原表达不仅受基因编码区域单核苷酸多态性、核苷酸片段插入、缺失、基因重组，非翻译区和内含子中调控元件调控，还受内源性反义rna、表观遗传学等机制调控，具备遗传特性及地域特征，转录调控机制研究不仅保证临床用血安全，同时利于掌握特殊血型分布规律，为人类血液基因遗传学提供可靠证据。

3、abo血型为isbt正式命名的第1个血型系统，系统包含a、b两种糖类抗原。a抗原和b抗原的表达受控于abo基因，但其不是abo基因的初级编码产物。abo基因编码α-1,3-n-乙酰氨基半乳糖转移酶(glycosyltransferase a，gta)和α-1,3-d-半乳糖基转移酶(glycosyltransferase b，gtb)。这两种酶将n-乙酰半乳糖或半乳糖共价连接到h抗原的岩藻糖末端，最终形成a抗原和b抗原；而o等位基因由于存在一个碱基的缺失使转录提前终止，不能编码有效的糖基转移酶，仅有h抗原表达。

4、isbt公布的o型亚型以c.261delg区分，存在c.261delg变异的所有等位基因被命名为abo*o.01.xx。没有c.261delg变异的等位基因被命名为abo*o.xx(数字)。截止目前，isbt公布的abo血型等位基因abo*o.01等位基因可根据变异分为42种，其它abo*o.xx等位基因包含20种。abo*o.01.01等位基因存在nt261位碱基缺失变异，由于c.261delg造成阅读框移码，导致出现提前终止密码子(premature terminate coden，ptc)，因此该等位基因仅编码116个氨基酸，这种蛋白质不具备无催化结构域。在abo*o.01.01等位基因对应的o1变异体基础上，除了在nt261位碱基缺(c.261delg)还有不同于a101和o01单个碱基变异，从而形成了abo*o.01中其他41种等位基因类型。不同的o型等位基因含不同的变异位点，含有c.261delg变异的变异体不产生任何有活性的转移酶，但这些变异多态性在abo基因内交换与重组形成的亚型中同样发挥了重要作用。因此，筛选新型o等位基因对于研究中国人群abo亚型的分子遗传背景至关重要，新型o等位基因的发现、分子生物学鉴定方法的确定和血型亚型的准确鉴定是确保临床安全用血的根本保证。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种abo血型系统中新型o等位基因，通过检测特征性snp分子标记找到了新的abo*o.01.xx，该新型o等位基因含c.106g>t；c.188g>a；c.189c>t；c.220c>t；c.261delg变异，可以作为研究abo血型的表现型及分子生物学基础，预防血型误判引起急性溶血反应提供理论依据。通过检测该新的血型基因，确保临床输血安全具有重要意义。

2、本发明首先提供abo血型系统中新型o等位基因，是abo血型基因1-7号外显子，其上包含有snp位点，所述的snp位点位于序列为seq id no:1的片段上，分别为c.106g>t；c.188g>a；c.189c>t；c.220c>t和c.261delg；

3、atggccgaggtgttgcggacgctggccggaaaaccaaaatgccacgcacttcgacctatgatccttttcctaataatgcttgtcttggtcttgtttggttacgggttcctaagccccagaagtctaatgccaggaagcctggaacgggggttctgcatggctgttagggaacctgaccatctgcagcatgtctcgttgccaaggatggtctacccccagtcaaaggtgctgacaccgtgtaggaaggatgtcctcgtggt-accccttggctggctcccattgtctgggagggcacattcaa catcgacatcctcaacgagcagttcaggctccagaacaccaccattgggttaactgtgtttgccatcaagaaatacgtggctttcctgaagctgttcctggagacggcggagaagcacttcatggtgggccaccgtgtccactactatgtcttcaccgaccagccggccgcggtgccccgcgtgacgctggggaccggtcggcagctgtcagtgctggaggtgcgcgcctacaagcgctggcaggacgtgtccatgcgccgcatggagatgatcagtgacttctgcgagcggcgcttcctcagcgaggtggattacctggtgtgcgtggacgtggacatggagttccgcgaccacgtgggcgtggagatcctgactccgctgttcggcaccctgcaccccggcttctacggaagcagccgggaggccttcacctacgagcgccggccccagtcccaggcctacatccccaaggacgagggcgatttctactacctgggggggttcttcggggggtcggtgcaagaggtgcagcggctcaccagggcctgccaccaggccatgatggtcgaccaggccaacggcatcgaggccgtgtggcacgacgagagccacctgaacaagtacctgctgcgccacaaacccaccaaggtgctctcccccgagtacttgtgggaccagcagctgctgggctggcccgccgtcctgaggaagctgaggttcactgcggtgcccaagaaccaccaggcggtccggaacccgtga(seq id no:1)。

4、本发明提供用于检测上述多个基因变异位点的测序引物对，具体的引物序列信息如下：

5、f:5′-ggccggaaaaccaaaatg-3′(seq id no:2)；

6、r:5′-gggcaccgcagtgaacct-3′(seq id no:3)。

7、本发明再一个方面还提供一种检测abo血型变异型的试剂盒，是通过检测上述的新型o等位基因来鉴定变异型。

8、本发明提供了一种abo血型新基因型，应用效果表明本发明所提供的基因变异位点及检测引物可以有效的用于先证者abo血型新变异型基因突变位点的快速检测。通过特定引物对待检测的血样dna进行聚合酶链反应扩增，扩增产物进行测序后进行基因型分析，确定待检样品是否存在上述基因变异位点标记。

1.一种新型o等位基因，其特征在于，所述的o等位基因包含有snp位点，所述的snp位点位于序列为seq id no:1的abo血型基因1-7号外显子上，分别为c.106g>t；c.188g>a；c.189c>t；c.220c>t和c.261delg。

2.一种引物对，其特征在于，所述的引物对用于检测权利要求1所述的o等位基因。

3.如权利要求2所述的引物对，其特征在于，所述的引物对，其上游引物的序列为seqid no:2，下游引物的序列为seq id no:3。

4.权利要求2所述的引物对在制备检测abo血型的制品中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的制品为pcr扩增测序检测试剂盒。

6.一种pcr扩增测序检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包含有用于检测权利要求1所述的o等位基因的引物对。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的引物对，其上游引物的序列为seqid no:2，下游引物的序列为seq id no:3。

8.一种检测abo血型的方法，其特征在于，所述的方法是通过检测权利要求1所述的o等位基因存在与否来进行检测。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的方法，是使用引物对待检测的血样dna进行聚合酶链反应扩增，扩增产物进行测序后进行基因型分析，确定待检样品是否存在权利要求1所述的o等位基因。