用于TaqMan荧光定量PCR法检测猪痘病毒的试剂盒
技术特征：
1.一种用于taqman荧光定量pcr法检测猪痘病毒的试剂盒，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述探针的序列5端标记的荧光基团为fam，序列3’端标记的淬灭基团为bhq1。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准阳性模版为猪痘病毒dna，包含orf16基因第1～第207bp序列。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准阳性模版经所述引物扩增后，所得的扩增产物与pmd18-t载体连接后获得标准质粒dna；编码所述扩增产物的基因具有seq id no:4所示的核苷酸序列。
5.利用权利要求1所述试剂盒检测猪痘病毒的taqman荧光定量pcr检测方法，该方法用于非诊断目的，其特征在于，其操作流程如下：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中荧光定量pcr的反应程序为：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火延伸34s，共计40个循环。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中荧光定量pcr的反应体系如下所示：
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，根据下述方法确定样本中含有猪痘病毒的情况：
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，根据下述方法确定样本中的猪痘病毒含量：
技术总结
本发明涉及病毒检测技术，旨在提供一种用于TaqMan荧光定量PCR法检测猪痘病毒的试剂盒。包括：反应总体积1/2的2×Premix Ex Taq酶；浓度各为10μmol/L的上游引物和下游引物；该两条引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，用于在PCR扩增过程中特异性扩增猪痘病毒中央编码区外围C20L‑C1L序列中的ORF16基因；浓度为10μmol/L的探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；标准阳性模版，其浓度按定量标准曲线制备的要求系列稀释；余量为无菌双蒸水。本发明基于对病毒靶向基因的核苷酸进行检测，操作简便、快速；特异性好，灵敏度高。由于不受培养条件限制定量检测，能真实反映猪痘病毒发生感染的情况；可对猪痘病毒进行快速定量检测，适于在临床实验室广泛推广应用。
技术研发人员：周兴东,宋厚辉,王晓杜,朱伟群,周莹珊,董婉玉,杜静,赵爽爽
受保护的技术使用者：浙江农林大学
技术研发日：
技术公布日：2024/11/18
文档序号 :
【 40051836 】
技术研发人员：周兴东,宋厚辉,王晓杜,朱伟群,周莹珊,董婉玉,杜静,赵爽爽
技术所有人：浙江农林大学
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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