一种表达植物基因OsTir1的转基因小鼠模型构建方法

1.一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述步骤1中，利用crispr/cas9技术并通过同源重组修复将目的序列敲入至小鼠6号染色体上的rosa26基因第一内含子中。

3.根据权利要求2所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述同源重组修复是针对cas9蛋白造成的rosa26基因dna双链断裂进行的，敲入位点位于rosa26基因第一内含子中的靶位点，该靶位点的序列如下所示：5’—ctccagtctttctagaagatggg—3’。

4.根据权利要求2所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述同源重组修复中采用的供体载体包括5’同源臂、用于表达植物基因ostir1的启动子、以转录终止序列6*sv40 pa为核心组成的loxp-stop-loxp序列、以kozak序列和植物基因ostir1 cds序列及rbg pa序列为核心组成的表达序列和3’同源臂，或者所述同源重组修复中采用的供体载体包括5’同源臂、用于表达植物基因ostir1的启动子、以转录终止序列6*sv40 pa为核心组成的loxp-stop-loxp序列、以kozak序列和突变的植物基因ostir1cds序列及rbg pa序列为核心组成的表达序列和3’同源臂；其中，5’同源臂为与rosa26基因第一内含子中敲入位点上游一段2.1～2.2kb的dna序列同源的序列片段，3’同源臂为与rosa26基因第一内含子中敲入位点下游一段2.1～2.2kb的dna序列同源的序列片段。

5.根据权利要求1或4所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述loxp-stop-loxp序列具体包括位于两个loxp之间的终止转录盒，所述终止转录盒包括pgk启动子和6*sv40 pa序列。

6.根据权利要求5所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述终止转录盒还包括抗性基因序列。

7.根据权利要求6所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述终止转录盒包括pgk启动子、新霉素抗性基因序列和6*sv40 pa序列。

8.根据权利要求4所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述步骤1具体包括以下步骤：

9.根据权利要求1所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述步骤2具体包括以下步骤：将敲入鼠与组织特异性cre工具鼠交配并获得cre阳性的杂合转基因小鼠。

10.根据权利要求9所述一种表达植物基因ostir1的转基因小鼠模型构建方法，其特征在于：所述cre工具鼠的cre酶特异性表达于肌肉组织。