用于将免疫抑制信号转化为共刺激信号的嵌合开关受体的制作方法

1.一种编码包含胞外结构域、跨膜结构域和一个或多个胞内结构域的嵌合多肽的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含pd-1胞外结构域或tgfβ受体胞外结构域或者特异性地识别并且结合至pdl1或tgfb的抗体或抗体的抗原结合部分，任选地其中：

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含pd-1胞外结构域变体，其中所述pd-1胞外结构域变体包含一个或多个氨基酸插入、缺失和/或取代。

3.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含pd-1胞外结构域变体，其中所述pd-1胞外结构域变体包含seq id no:10的氨基酸序列。

4.如权利要求0所述的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含tgfβ受体胞外结构域或其变体。

5.如权利要求0所述的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含seq id no:12的氨基酸序列或seq id no:13的氨基酸序列。

6.如权利要求0所述的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含特异性地识别并且结合至pdl1、tgfβ或者tgfβ1、tgfβ2和tgfβ3中的任何一者或多者的抗体或抗体的抗原结合部分。

7.如权利要求0所述的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含特异性地识别并且结合至pdl1、tgfβ或者tgfβ1、tgfβ2和tgfβ3中的任何一者或多者的scfv。

8.如权利要求0所述的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含特异性地识别并且结合至pdl1或tgfβ1的scfv。

9.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述一个或多个胞内结构域包含一个或多个胞内信号传导结构域，任选地其中所述一个或多个胞内信号传导结构域选自由以下组成的组：cd28胞内信号传导结构域、cd2胞内信号传导结构域、myd88胞内信号传导结构域、icos胞内信号传导结构域、dap10胞内信号传导结构域、ox40胞内信号传导结构域、baffr胞内信号传导结构域和cd40胞内信号传导结构域、其任何变体及其任何组合。

10.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述一个或多个胞内结构域包含seq id no:19、seq id no:20、seq id no:15、seq id no:18、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:27、seq id no:29、seq id no:33、seq id no:31、seq id no:35中一者或多者的氨基酸序列及其任何组合。

11.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包括cd28跨膜结构域、cd2跨膜结构域、pd-1跨膜结构域、icos跨膜结构域、dap10跨膜结构域、ox40跨膜结构域、baffr跨膜结构域或cd40跨膜结构域。

12.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包含seq id no:17、seq id no:22、seq id no:26、seq id no:28、seq id no:30、seq id no:32或seq idno:34的氨基酸序列。

13.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含变体cd28胞内结构域，并且任选进一步其中所述胞内结构域包含seq id no:19或seq id no:20的氨基酸序列。

14.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含cd2胞内结构域或其变体，任选进一步其中所述跨膜结构域包含cd2跨膜结构域。

15.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，其中所述胞内结构域包含至少一个sh3结构域和/或至少一个gyf结合结构域，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

16.如权利要求15所述的多核苷酸，其中所述sh3结构域包含seq id no:168或seq idno:169的氨基酸序列，并且所述gyf结合结构域包含seq id no:176的氨基酸序列。

17.如权利要求15或16所述的多核苷酸，其中所述sh3结构域包含seq id no:170、171、172、173、174、175和176中至少一个的氨基酸序列。

18.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，所述变体cd2胞内结构域包含seq id no:170和seq id no:176的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

19.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，所述变体cd2胞内结构域包含seq id no:174和seq id no:175的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

20.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，所述变体cd2胞内结构域包含seq id no:170、171、173、174和175的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

21.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，所述变体cd2胞内结构域包含seq id no:170-176的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

22.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含截短的cd2胞内结构域，其中所述截短的cd2胞内结构域包含seq id no:24的氨基酸序列或与seq idno:24的氨基酸序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列。

23.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述胞内结构域包含cd2胞内结构域，所述cd2胞内结构域具有seq id no:23的氨基酸序列或与seq id no:23的氨基酸序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列。

24.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域包含cd2跨膜结构域，任选地其中所述cd2跨膜结构域包含seq id no:22的氨基酸序列或与seq id no:22的氨基酸序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列。

25.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多肽进一步包含位于所述胞外结构域和所述跨膜结构域之间的铰链结构域，任选地其中所述铰链结构域包含seq idno:36的氨基酸序列或与seq id no:36的氨基酸序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列。

26.如权利要求0所述的多核苷酸，其中所述多肽包含seq id no:75-115中的任一者的氨基酸序列或与seq id no:75-115中的任一者具有至少90％同一性的氨基酸序列。

27.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多肽进一步包含信号肽。

28.如权利要求27所述的多核苷酸，其中所述信号肽包含cd8α信号肽或tgfb受体信号肽，任选地其中所述信号肽包含seq id no:1或2的氨基酸序列。

29.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步编码第二多肽，任选地其中所述第二多肽包含嵌合细胞因子受体(ccr)或嵌合抗原受体(car)。

30.如权利要求29所述的多核苷酸，其中所述ccr具有组成型活性或是诱导型的。

31.一种载体，其包含如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸。

32.如权利要求31所述的载体，其中所述载体是病毒载体，任选地其中所述载体是慢病毒载体。

33.一种嵌合多肽，其由如权利要求0-30中任一项所述的多核苷酸或由如权利要求31或32所述的载体编码。

34.一种包含胞外结构域、跨膜结构域和一个或多个胞内结构域的嵌合多肽，其中所述胞外结构域包含pd-1胞外结构域或tgfβ受体胞外结构域或者特异性地识别并且结合至pdl1或tgfb的抗体或抗体的抗原结合部分，任选地其中：

35.如权利要求34所述的嵌合多肽，其中所述胞外结构域包含pd-1胞外结构域变体，其中所述pd-1胞外结构域变体包含一个或多个氨基酸插入、缺失和/或取代。

36.如权利要求34或35所述的嵌合多肽，其中所述pd-1胞外结构域变体包含seq idno:10的氨基酸序列。

37.如权利要求34所述的嵌合多肽，其中所述胞外结构域包含tgfβ受体胞外结构域或其变体。

38.如权利要求37所述的嵌合多肽，其中所述胞外结构域包含seq id no:12的氨基酸序列或seq id no:13的氨基酸序列。

39.如权利要求34-38中任一项所述的嵌合多肽，其中所述一个或多个胞内结构域包含一个或多个胞内信号传导结构域，任选地其中所述一个或多个胞内信号传导结构域选自由以下组成的组：cd28胞内信号传导结构域、cd2胞内信号传导结构域、myd88胞内信号传导结构域、icos胞内信号传导结构域、dap10胞内信号传导结构域、ox40胞内信号传导结构域、baffr胞内信号传导结构域和cd40胞内信号传导结构域、其任何变体及其任何组合。

40.如权利要求34-38中任一项所述的嵌合多肽，其中所述一个或多个胞内结构域包含seq id no:19、seq id no:20、seq id no:15、seq id no:18、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:15、seq id no:29、seq id no:27、seq id no:33、seq id no:31、seq idno:35中一者或多者的氨基酸序列及其任何组合。

41.如权利要求34-40中任一项所述的嵌合多肽，其中所述跨膜结构域包括cd28跨膜结构域、cd2跨膜结构域、pd-1跨膜结构域、icos跨膜结构域、dap10跨膜结构域、ox40跨膜结构域、baffr跨膜结构域或cd40跨膜结构域。

42.如权利要求34-41中任一项所述的嵌合多肽，其中所述跨膜结构域包含seq id no:17、seq id no:22、seq id no:26、seq id no:28、seq id no:30、seq id no:32或seq idno:34的氨基酸序列。

43.如权利要求34-42中任一项所述的嵌合多肽，其中所述一个或多个胞内结构域包含变体cd28胞内结构域，并且任选进一步其中所述变体cd28胞内结构域包含seq id no:19或seq id no:20的氨基酸序列。

44.如权利要求34-43中任一项所述的嵌合多肽，其中所述一个或多个胞内结构域包含cd2胞内结构域或其变体，任选进一步其中所述跨膜结构域包含cd2跨膜结构域。

45.如权利要求34-44中任一项所述的嵌合多肽，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，其中所述胞内结构域包含至少一个sh3结构域和/或至少一个gyf结合结构域，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

46.如权利要求45所述的嵌合多肽，其中所述sh3结构域包含seq id no:168或169的氨基酸序列，并且所述gyf结合结构域包含seq id no:176的氨基酸序列。

47.如权利要求45或46所述的嵌合多肽，其中所述胞内结构域包含seq id no:170、171、172、173、174、175和176中至少一个的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

48.如权利要求34-47中任一项所述的嵌合多肽，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，所述变体cd2胞内结构域包含seq id no:170-176中至少两个的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

49.如权利要求34-48中任一项所述的嵌合多肽，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，所述变体cd2胞内结构域包含seq id no:170和176的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

50.如权利要求34-49中任一项所述的嵌合多肽，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，所述变体cd2胞内结构域包含seq id no:174和175的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

51.如权利要求34-50中任一项所述的嵌合多肽，其中所述胞内结构域包含变体cd2胞内结构域，所述变体cd2胞内结构域包含seq id no:170、171、173、174和175的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

52.如权利要求34-51中任一项所述的嵌合多肽，其中所述胞内结构域包含cd2胞内结构域的变体，所述cd2胞内结构域的变体包含seq id no:170-176的氨基酸序列，并且任选地所述变体cd2胞内结构域是截短的cd2胞内结构域。

53.如权利要求34-52中任一项所述的嵌合多肽，其中所述一个或多个胞内结构域包含截短的cd2胞内结构域，其中所述截短的cd2胞内结构域包含seq id no:24的氨基酸序列或与seq id no:24的氨基酸序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列。

54.如权利要求34-53中任一项所述的嵌合多肽，其中所述一个或多个胞内结构域包含cd2胞内结构域，所述cd2胞内结构域具有seq id no:23的氨基酸序列或与seq id no:23的氨基酸序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列。

55.如权利要求34-54中任一项所述的嵌合多肽，其中所述跨膜结构域包含cd2跨膜结构域，任选地其中所述cd2跨膜结构域包含seq id no:22的氨基酸序列或与seq id no:22的氨基酸序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列。

56.如权利要求34-55中任一项所述的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽进一步包含信号肽，任选是cd8α信号肽，任选地其中所述信号肽包含seq id no:1的氨基酸序列。

57.如权利要求34-56中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽进一步包含位于所述胞外结构域和所述跨膜结构域之间的铰链结构域，任选地其中所述铰链结构域包含seq idno:36的氨基酸序列或与seq id no:36的氨基酸序列具有至少约90％同一性的氨基酸序列。

58.如权利要求34-57中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽包含seq id no:75-115中的任一者的氨基酸序列或与seq id no:75-115中的任一者具有至少90％同一性的氨基酸序列。

59.如权利要求34-58中任一项所述的嵌合多肽，其中所述多肽进一步包含信号肽。

60.如权利要求59所述的嵌合多肽，其中所述信号肽包含cd8α信号肽或tgfb受体信号肽，任选地其中所述信号肽包含seq id no:1或2的氨基酸序列。

61.一种经工程化的免疫细胞，其包含如权利要求0-30中任一项所述的多核苷酸。

62.一种经工程化的免疫细胞，其包含如权利要求31-32所述的载体。

63.一种经工程化的免疫细胞，其包含或表达如权利要求33-60中任一项所述的嵌合多肽。

64.如权利要求61-63中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述细胞进一步包含或表达car，其中所述car包含胞外配体结合结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。

65.如权利要求64所述的经工程化的免疫细胞，其中所述car胞内信号传导结构域包含cd3ζ信号传导结构域、cd28信号传导结构域和4-1bb信号传导结构域中的任何一者或多者。

66.如权利要求64或权利要求65所述的经工程化的免疫细胞，其中所述car胞外配体结合结构域特异性地识别/结合至dll3。

67.如权利要求61-66中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述细胞进一步包含或表达嵌合细胞因子受体(ccr)。

68.如权利要求67所述的经工程化的免疫细胞，其中所述ccr具有组成型活性或是诱导型的。

69.如权利要求61-68中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述嵌合多肽包含胞内结构域，所述胞内结构域包含seq id no:19或24的氨基酸序列。

70.如权利要求69所述的经工程化的免疫细胞，其中所述嵌合多肽包含pd1胞外结构域或其变体，其中与包含含有相同胞外结构域和含seq id no:18或23的氨基酸序列的胞内结构域的嵌合多肽的经工程化的免疫细胞相比，所述免疫细胞分泌降低水平的细胞因子，并且任选地其中细胞因子的降低水平为约1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍和5倍降低。

71.一种经工程化的免疫细胞，其包含或表达dll3 car和ccr，所述dll3 car包含seqid no:73或165的氨基酸序列，所述ccr包含seq id no:162的氨基酸序列。

72.如权利要求71所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞包含或表达有或没有信号肽的含有seq id no:74的氨基酸序列的多肽。

73.如权利要求61-72中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述免疫细胞是t细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞(til)、nk细胞、表达tcr的细胞、树突细胞或nk-t细胞。

74.如权利要求61-73中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述细胞是自体t细胞。

75.如权利要求61-73中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述细胞是同种异体t细胞。

76.一种细胞群，其包含至少约1x104个、1x105个、1x106个、1x107个或1x108个如权利要求61-75中任一项所述的细胞。

77.一种组合物，其包含如权利要求61-75中任一项所述的细胞或如权利要求76所述的细胞群以及药学上可接受的载体。

78.一种治疗患者的疾病或病症的方法，其包括向所述患者施用如权利要求61-75中任一项所述的细胞、如权利要求76所述的细胞群或如权利要求77所述的组合物。

79.如权利要求78所述的方法，其中所述受试者是人并且所述病症是癌症。

80.如权利要求79所述的方法，其中所述癌症是血液恶性肿瘤或实体癌。

81.如权利要求80所述的方法，其中所述癌症是血液恶性肿瘤，其任选地选自急性淋巴细胞性白血病(all)、急性髓样白血病(aml)、慢性髓性白血病(cml)、慢性嗜酸细胞性白血病(cel)、骨髓增生异常综合征(mds)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)和多发性骨髓瘤(mm)。

82.如权利要求80所述的方法，其中所述癌症是实体癌，其为胆管癌、膀胱癌、骨或软组织癌、脑瘤、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠腺癌、结肠直肠癌、硬纤维瘤、胚胎癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、胃腺癌、多形性胶质母细胞瘤、妇科肿瘤、头颈部鳞状细胞癌、肝癌、肺癌、恶性黑素瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、胰腺导管腺癌、原发性星形细胞瘤、原发性甲状腺癌、前列腺癌、肾癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、睾丸生殖细胞肿瘤、尿路上皮癌、子宫肉瘤或子宫癌。

83.一种制备经工程化的免疫细胞的方法，所述方法包括将如权利要求0-30中任一项所述的多核苷酸或如权利要求31或32所述的载体引入免疫细胞的步骤。

84.如权利要求83所述的方法，其中将所述多核苷酸或所述载体整合到所述免疫细胞基因组中。

85.如权利要求83或84所述的方法，其中所述载体是病毒载体。

86.如权利要求83-85中任一项所述的方法，其中所述载体是慢病毒载体，并且通过随机整合将所述多核苷酸或所述载体整合到所述基因组中。

87.如权利要求83-85中任一项所述的方法，其中通过位点特异性整合将所述多核苷酸或所述载体整合到所述基因组中。

88.如权利要求87所述的方法，其中将所述多核苷酸或所述载体整合到trac基因座、cd52基因座、cd70基因座、pd1基因座、tim3基因座、cish基因座、tigit基因座或cbl-b基因座中的一者或多者中。

89.如权利要求87或88所述的方法，其中将所述多核苷酸或所述载体整合到trac基因座或cd52基因座中。

90.一种经工程化的免疫细胞，其通过如权利要求83-89中任一项所述的方法制备。