一种人源神经干细胞保存液及其制备方法与流程

本发明属于细胞培养，具体涉及一种人源神经干细胞保存液及其制备方法。

背景技术：

1、神经干细胞(neural stem cells，nsc)是干细胞家族中的重要成员，来源于发育早期的外胚层，具有自我更新和分化潜能，可以部分替代丢失和受损的神经细胞，用于修复受损的神经系统。尽管神经干细胞在治疗阿尔茨海默症等神经退行性疾病的详细机理尚不清楚，但其临床应用越来越受到关注，并且取得一定的成果，目前已成为未来生命科学和医学研究领域广泛关注的焦点。

2、目前，有资质实现高通量分离、培养、扩增人源神经干细胞的国内机构很少，但是人源神经干细胞的临床应用范围十分广泛。神经干细胞的培养已趋向成熟，神经干细胞治疗应用也很深入，然而神经干细胞临床项目和受众面广泛的神经干细胞治疗往往涉及细胞制备单位和细胞移植单位之间的长途运输。活细胞是细胞制品的关键有效成分，长时间的运输对细胞活力的维持提出高质量的要求。因此，迫切需要开发一种神经干细胞保存液，使神经干细胞在此保护液中活性持久维持，满足运输到国内大多数地区及周边国家的需求，同时能够直接用于人体，安全无毒。

3、目前，国内干细胞机构通常采用生理盐水、细胞培养基作为临床干细胞应用的溶液介质。生理盐水安全便利，常作为输注介质，然而在生理盐水中的干细胞活力下降速度快，仅用生理盐水作细胞保存液的方法只适合短暂保存或即时使用的干细胞制品。细胞培养基也常作为细胞保护液的主要成分，其提供细胞生长代谢所需的营养物质，包括氨基酸、糖类、无机盐、维生素等，对于维持细胞渗透压及活力有较好的作用。然而，目前国内大部分细胞培养基是科研级应用，不能应用于临床研究。同时由于生产厂家、生产方法的不同，细胞培养基的成本、质量也不等，较好质量的细胞培养基价格更贵。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的上述问题，本发明的主要目的是提供一种人源神经干细胞保存液，其能使人源神经干细胞在运输过程中保持高的细胞活率。

2、本发明的另一目的是提供所述人源神经干细胞保存液的制备方法。

3、本发明的再一目的是提供一种人源神经干细胞悬液，保存72小时后细胞活率仍不低于90％。

4、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

5、本发明提供一种人源神经干细胞保存液，其包含：30mm钾离子，30mm钠离子，0.5mm镁离子，5mm磷酸二氢根离子，5mm氢氧根离子，20mm醋酸根离子，32mm氯离子，5mm葡萄糖，200mm山梨醇和纯水。

6、作为优选，所述葡萄糖为临床批准使用的葡萄糖溶液。

7、作为优选，所述钾离子来自于氯化钾；

8、所述镁离子来自于六水合氯化镁；

9、所述磷酸二氢根离子来自于二水合磷酸二氢钠；

10、所述氢氧根离子来自于氢氧化钠；

11、所述醋酸根离子来自于丙酮酸钠；

12、所述钠离子来自于氢氧化钠、二水合磷酸二氢钠和丙酮酸钠；

13、所述氯离子来自于氯化钾和六水合氯化镁。

14、作为优选，所述人源神经干细胞保存液为无细菌、病毒、支原体污染且内毒素含量<5eu/ml的液态介质。

15、本发明还提供所述人源神经干细胞保存液的制备方法，包括：将氯化钾、氢氧化钠、二水合磷酸二氢钠、六水合氯化镁、丙酮酸钠、葡萄糖和山梨醇混合，边加纯水边搅拌均匀，定容至100ml后，用250ml的0.22μm滤器过滤，即得。

16、本发明还提供一种人源神经干细胞悬液，制备方法包括：所述人源神经干细胞500g离心3min，弃去上清后，所得保存液重悬人源神经干细胞，调整其浓度为1-9×10^6/ml，悬液分装，转移至2-8℃保存。

17、作为优选，所述人源神经干细胞悬液中人源神经干细胞的浓度为2-5×10^6/ml。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明的人源神经干细胞保存液延长神经干细胞的活率维持时间，利用现有交通工具扩大神经干细胞的物理应用范围，降低保护液的制备成本，来源广泛、方法简单且安全可靠，临床可以直接应用，经测试神经干细胞在该保护液中保存72小时后，细胞活率仍不低于90％。

1.一种人源神经干细胞保存液，其特征在于，

2.根据权利要求1所述的人源神经干细胞保存液，其特征在于，所述葡萄糖为临床批准使用的葡萄糖溶液。

3.根据权利要求1所述的人源神经干细胞保存液，其特征在于，所述钾离子来自于氯化钾；

4.根据权利要求1所述的人源神经干细胞保存液，其特征在于，所述人源神经干细胞保存液为无细菌、病毒、支原体污染且内毒素含量<5eu/ml的液态介质。

5.权利要求1至4任一项所述人源神经干细胞保存液的制备方法，其特征在于，包括：将氯化钾、氢氧化钠、二水合磷酸二氢钠、六水合氯化镁、丙酮酸钠、葡萄糖和山梨醇混合，边加纯水边搅拌均匀，定容至100ml后，用250ml的0.22μm滤器过滤，即得。

6.一种人源神经干细胞悬液，其特征在于，其包含权利要求1至4任一项所述人源神经干细胞保存液，浓度为1-9×10^6/ml；

7.根据权利要求6所述的人源神经干细胞悬液，其特征在于，所述人源神经干细胞悬液中人源神经干细胞的浓度为2-5×10^6/ml。