胚胎干细胞的基因编辑方法与流程

1.一种用于改善陆生或水生动物性状的方法，其包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述胚胎干细胞获自非人哺乳动物；并且所述方法进一步包括：

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述胚胎干细胞获自鱼类；并且所述方法进一步包括：

4.根据权利要求1所述的方法，其中产生胚胎包括使(a)中获得的一个或更多个基因编辑的胚胎干细胞与卵母细胞接触。

5.一种用于建立在陆生牲畜或水产动物中具有改进性状的基因编辑细胞系的方法，其包括：

6.根据权利要求5所述的方法，还包括(c)从获自(b)中产生的所述基因编辑的胚胎干细胞系的一个或更多个基因编辑的胚胎干细胞产生胚胎。

7.根据权利要求1、5或6所述的方法，其中所述胚胎干细胞获自牛、猪或鱼。

8.根据权利要求1、2、4、5或6所述的方法，其中所述胚胎干细胞获自牛。

9.根据权利要求1、2、4、5或6所述的方法，其中所述胚胎干细胞获自猪。

10.根据权利要求1或5所述的方法，其中所需基因编辑在anp32、anpep、tmprss2、tmprss4、nanos2、cd163、黑皮质素-4受体(mc4r)、hmga、igf2、hal、mx1、bat2、ehmt2、prdm1、prdm14或esr基因中。

11.根据权利要求1或5所述的方法，其中所述的所需基因编辑在prlr、nanos2、deadend(dnd)、apaf1、smc2、gart、tfb1m、sirt1、sirt2、lpl、crtc2、six4、ucp2、ucp3、urb1、eva1c、tmem68、tgs1、lyn、xkr4、foxa2、gbp2、gbp5、fgd6、npc1l1、nudcd3、acss1、fchsd2、ppp1r12a、zfp36l2、cspp1、chi3l2、gbp6、ppfibp1、rep15、cyp4f2、tigd2、pyurf、slc10a2、arhgef17、relt、prdm2、kdm5b、plag1、kcna6、ndufa9、akap3、c5h12orf4、rad51ap1、fgf6、ccnd2、csmd3、aqp3、aqp7、hspb8、dcaf8、slc16a3或tigar基因中。

12.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所需基因编辑影响包括以下的形状：高海拔适应和对缺氧的反应、冷适应、体型和身材、对疾病和细菌感染的抵抗力、繁殖或生长和饲料效率。

13.根据权利要求8所述的方法，其中所需基因编辑影响包括以下的形状：高海拔适应和对缺氧的反应、冷适应、体型和身材、对疾病和细菌感染的抵抗力、繁殖、奶的产量和成分、生长和饲料效率或无角表型。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述基因编辑试剂包含大范围核酸酶、锌指核酸酶(zfn)、转录激活因子样效应物核酸酶(talen)或至少一种向导rna(grna)。

15.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述基因编辑试剂包含至少一种grna。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述基因编辑试剂还包括cas蛋白。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述基因编辑试剂还包括cas9。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所需基因编辑包括缺失、编码取代的氨基酸的核苷酸取代或过早终止密码子。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中使获自陆生或水生动物的胚胎干细胞与有效量的基因编辑试剂接触包括电穿孔或核转染。

20.一种通过根据权利要求1-4或6-18中任一项所述方法产生的胚胎。

21.一种通过权利要求5-19中任一项所述的方法产生的胚胎干细胞系。

22.根据权利要求21所述的胚胎干细胞系，其中所述细胞是在无饲养层的条件下生长的。