一种结合ELISA和SERS的Myo抗原检测方法

1.一种结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，所述步骤s1中金纳米粒子的粒径为30-55nm，紫外吸收波长为526nm。

3.如权利要求1所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，所述步骤s2中拉曼信号金纳米粒子的制备方法如下：将金纳米粒子用去离子水稀释80-120倍，所得金纳米粒子溶液与拉曼信号分子溶液按照体积比为80-120:1进行混合，用缓冲液清洗后再重新分散于缓冲液中，制得拉曼信号金纳米粒子。

4.如权利要求3所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，所述拉曼信号分子包括但不限于ir808，拉曼信号分子溶液浓度为0.01-100mm。

5.如权利要求1所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，所述步骤s3中免疫信号金纳米粒子的制备方法如下：在拉曼信号金粒子中分别加入20-50ul4-6mm edc和20-30ul 4-6mm nhs，活化40-80min，再加入20ug-50ug myo抗体，在2-6℃孵育过夜，离心后加入封闭液，在室温下反应0.5-1.5h封闭剩余活性位点，离心后再次分散在封闭液中，制得所述的免疫信号金纳米粒子。

6.如权利要求3或5所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，缓冲液包括但不限于1-100mm ph5.5-8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，硼酸-硼砂缓冲液，柠檬酸-硼砂缓冲液。

7.如权利要求1所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，所述步骤s4中包被抗体的微量滴定板的制备方法如下：将纯化后的抗体用ph 5.5-8的pb稀释，滴入微量滴定板中，每孔抗体量为100-600ng，37℃孵育2h，pbs清洗一次，所述pbs溶液包括0.1-0.3m磷酸氢二钠、0.1-0.3m磷酸二氢钠和140-160mm pb，加入封闭液在30-40℃封闭1-3h，封闭滴定板未被占据的空隙。

8.如权利要求5或7所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，所述封闭液包括1-20wt％bsa、1-200mm ph 5.5-8的pb溶液、15-100mm无机氯盐和1-10wt％表面活性剂，所述表面活性剂包括但不限于tw-20、tw-60、tw-80、chaps、triton-x100，所述无机氯盐包括但不限于nacl、kcl、mgcl2。

9.如权利要求1所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，所述步骤s5双抗夹心结构制备方法如下：将待测样品、步骤s3制得的免疫信号金纳米粒子分别加入步骤s4制得的包被抗体的微量滴定板中一起混合、在30-50℃孵育3-7min，吸走滴定板内的溶液，使用pbs-t清洗，获得双抗夹心结构；所述pbs-t溶液为pbs溶液和tw-20的混合溶液，所述pbs-t溶液中tw-20的质量分数为1-10wt％。

10.如权利要求1所述的结合elisa和sers的myo抗原检测方法，其特征在于，所述步骤s6中拉曼光谱仪为便携式拉曼光谱仪或其他类型拉曼光谱仪，激发波长为785nm。