氧氟沙星或其衍生物在制备细胞外囊泡分泌的抑制剂中的应用

本发明涉及生物医学，特别涉及一种氧氟沙星或其衍生物在制备细胞外囊泡分泌的抑制剂中的应用。

背景技术：

1、细胞外囊泡是由细胞分泌产生的一种膜性囊泡，其表面及内部携带有丰富的继承自母体细胞的生物活性分子，包括蛋白质、脂质、核酸等。细胞外囊泡作为生物体内天然的信息传递载体，以自分泌、旁分泌方式作用于临近细胞或藉由循环系统到达远隔细胞，通过受体-配体结合、内吞作用、胞浆膜融合等方式直接作用于靶细胞，参与复杂的细胞间物质交换及信息交流，从而调控受体细胞的表型和功能，参与许多重要的病理或生理学过程。现有研究已经证实，细胞外囊泡含量和成份的异常改变与免疫反应、心血管疾病、中枢神经系统相关疾病和癌症等多种病理事件的进展有关。例如，中脑多巴胺能神经细胞可以通过活跃细胞外囊泡释放，促进α-突触核蛋白的扩散与沉积，加速帕金森病的进展；肿瘤细胞可以利用细胞外囊泡将免疫抑制蛋白pd-l1分泌至细胞外环境，在肿瘤微环境局部和全身循环系统内抑制免疫细胞的活化和功能，从而介导肿瘤逃逸和免疫治疗抵抗。

2、大量研究已经证实，多种病理事件中均存在细胞外囊泡含量的异常改变，而抑制细胞外囊泡异常分泌可以缓解疾病进展或改善治疗效果。一项研究纳入69例胃癌患者的研究发现，术前血浆pd-l1+细胞外囊泡含量与患者预后相关，与低水平血浆pd-l1+细胞外囊泡组患者相比，高水平血浆pd-l1+细胞外囊泡组患者的总体生存期显著缩短(p＝0.004)，生存分析显示血浆pd-l1+细胞外囊泡是独立的预后影响因素(p＝0.026)。利用基因工程手段敲除调控细胞外囊泡生成的关键蛋白rab27a，抑制肿瘤细胞的细胞外囊泡分泌，可以显著减缓包、括前列腺癌、恶性黑色素瘤等在内多种肿瘤模型的生长速度，同时改善anti-pd-1免疫治疗效果。

3、在生物研究领域，mikael simons教授报道鞘磷脂酶抑制剂gw4869可以通过阻断神经酰胺介导的细胞膜萌芽从而抑制细胞外囊泡生成，y27632通过特异性抑制rho相关蛋白激酶rock1/2干扰细胞骨架的重组从而抑制微囊泡的生成。此外，还有研究报道manumycin a、calpeptin、磺胺异恶唑等多种化合物也可以抑制某些细胞的细胞外囊泡分泌。然而，当前尚缺乏临床可用的抑制细胞外囊泡分泌的方法，也缺乏抑制特定亚型细胞外囊泡分泌的策略。

4、因此，针对现有技术的瓶颈与不足，有必要开发一种细胞外囊泡分泌的抑制剂。

技术实现思路

1、本发明目的是提供一种氧氟沙星或其衍生物在制备细胞外囊泡分泌的抑制剂中的应用，氧氟沙星或其衍生物能够抑制总细胞外囊泡及特定亚型细胞外囊泡分泌。

2、为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、在本发明的第一方面，提供了氧氟沙星或其衍生物在制备细胞外囊泡分泌的抑制剂中的应用。

4、进一步地，所述细胞外囊泡分泌的抑制剂包括抑制总细胞外囊泡及特定亚型细胞外囊泡分泌的抑制剂；

5、细胞包括肿瘤细胞系(口腔癌细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞、黑色素瘤细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、胰腺癌细胞、多发性骨髓瘤细胞)、血细胞(巨噬细胞、树突状细胞、t淋巴细胞、b淋巴细胞)、干细胞(骨髓来源间充质干细胞、脱落乳牙来源间充质干细胞、内皮祖细胞)、原代组织细胞(小肠上皮细胞、神经元细胞、少突神经胶质细胞、小神经胶质细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞、肝脏细胞、内皮细胞、心肌细胞)等组合中的至少一种；

6、所述特定亚型细胞外囊泡包括上皮细胞来源evs、内皮细胞来源evs、cd8+细胞来源evs、cd45+evs、pd-l1+evs、pd-1+evs、epcam+evs、egfr+evs的至少一种；

7、所述细胞外囊泡包括凋亡小体、微泡、微囊泡、外泌体中的至少一种。

8、进一步地，所述氧氟沙星或其衍生物包括：氧氟沙星、第一衍生物和第二衍生物中的一种；

9、所述第一衍生物包括诺氟沙星、左氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、洛美沙星、格帕沙星、莫西沙星、莫西沙星、曲伐沙星、克林沙星、司帕沙星、苹果酸奈诺沙星等喹诺酮类药物，以及盐酸左旋氧氟沙星、乳酸左旋氧氟沙星、加硫酸左旋氧氟沙星、马来酸左旋氧氟沙星、左氧氟沙星丙烯酮衍生物、左氧氟沙星醛缩氨基硫脲类衍生物、氧氟沙星的α，β-不饱和酮衍生物、左氧氟沙星醛缩4-芳基氨基硫脲类衍生物、双-氟喹诺酮噻二唑脲类左氧氟沙星衍生物、氧氟沙星酰胺类衍生物中的一种；

10、所述第二衍生物包括氧氟沙星或所述第一衍生物中的氟喹诺酮骨架与α，β-不饱和酮或酰胺基团结合获得的衍生物。

11、在本发明的第二方面，提供了氧氟沙星或其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

12、在本发明的第三方面，提供了氧氟沙星与anti-pd-1单克隆抗体联用在制备抗肿瘤药物中的应用。

13、进一步地，所述抗肿瘤药物中的肿瘤包括结肠癌、口腔鳞癌、恶性黑色素瘤中的至少一种。

14、进一步地，所述抗肿瘤药物还包括药学上可接受的辅料。

15、进一步地，所述抗肿瘤药物的剂型包括颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂和分散剂中的至少一种。

16、本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：

17、本发明提供一种氧氟沙星或其衍生物在制备细胞外囊泡分泌的抑制剂中的应用，本发明的体外细胞实验表明，氧氟沙星可显著抑制b16f10、mc38、h1264、cal27等细胞的总细胞外囊泡分泌。此外，氧氟沙星尤其对上述细胞分泌pd-l1+细胞外囊泡的抑制作用更为显著。而在缺失stam2的肿瘤细胞中，氧氟沙星则无法继续抑制总细胞外囊泡、pd-l1+细胞外囊泡等的分泌。

18、动物实验表明，氧氟沙星可以显著抑制b16f10荷瘤小鼠循环血中pd-l1+细胞外囊泡的含量，也可以抑制4nqo诱导口腔鳞癌原位肿瘤模型小鼠循环血和局部肿瘤组织中pd-l1+细胞外囊泡的含量。并且，氧氟沙星与anti-pd-1单克隆抗体联用可显著改善恶性黑色素瘤、口腔鳞癌等肿瘤的免疫治疗疗效。而在stam2缺失的b16f10小鼠模型体内则未观察到氧氟沙星的上述效果。

1.氧氟沙星或其衍生物在制备细胞外囊泡分泌的抑制剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细胞外囊泡分泌的抑制剂包括抑制总细胞外囊泡及特定亚型细胞外囊泡分泌的抑制剂；

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述氧氟沙星或其衍生物包括：氧氟沙星、第一衍生物和第二衍生物中的一种；

4.氧氟沙星或其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

5.氧氟沙星与anti-pd-1单克隆抗体联用在制备抗肿瘤药物中的应用。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物中的肿瘤包括结肠癌、口腔鳞癌、恶性黑色素瘤中的至少一种。

7.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物还包括药学上可接受的辅料。

8.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物的剂型包括颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂和分散剂中的至少一种。