核酸分子、包含其的重组杆状病毒及其应用的制作方法

1.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括：核酸片段1、核酸片段2和位于所述核酸片段1及所述核酸片段2之间的用于表达外源片段的外源基因表达框；

2.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述尾对尾基因对来自杆状病毒。

3.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述外源片段包括选择标记基因和目标基因中的一种或者多种。

4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于，所述外源基因表达框满足如下1)和2)所示条件中的一种或者多种：

5.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于，所述外源片段满足如下(a)和(b)所示条件中的一种或者多种：

6.根据权利要求1至5中任一项所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的序列如seq id no.48中第2903bp至第8875bp所示或者seq id no.52中第749bp至第4776bp所示所示。

7.重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包括权利要求1至6中任一项所述的核酸分子。

8.重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒的基因组包括权利要求5至6中任一项所述的核酸分子。

9.根据权利要求8所述的重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒满足如下a)和b)所示条件中的一个或者多个：

10.根据权利要求9所述的重组杆状病毒，其特征在于，所述选择标记基因插入在ob1位点、所述ob2位点和ob3位点中的任一位点；

11.权利要求8至10中任一项所述重组杆状病毒的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

12.根据权利要求11所述的重组杆状病毒的构建方法，其特征在于，同源重组采用的重组酶为red重组酶、bxb1整合酶、φc31整合酶、cre重组酶或者flp重组酶。

13.根据权利要求11至12中任一项所述的重组杆状病毒的构建方法，其特征在于，所述供体质粒包括穿梭质粒。

14.一种腺相关病毒包装载体系统，其特征在于，其包括aav包装必需元件，所述aav包装必需元件包括cap基因、rep基因以及itr基因中的一种或者多种；所述aav包装必需元件位于相同或者不同的权利要求1至6中任一项所述的核酸分子中。

15.外源片段的表达产物的生产方法，其特征在于，所述生产方法包括如下步骤：

16.根据权利要求15所述的外源片段的表达产物的生产方法，其特征在于，所述宿主细胞包括昆虫细胞系。

17.根据权利要求16所述的外源片段的表达产物的生产方法，其特征在于，所述昆虫细胞系包括鳞翅目昆虫细胞系。

18.根据权利要求15至17中任一项所述的外源片段的表达产物的生产方法，其特征在于，所述生产方法还包括检测所得重组杆状病毒的滴度的步骤；

19.一种重组腺相关病毒的生产方法，其特征在于，所述生产方法采用权利要求14中所述的腺相关病毒包装载体系统。