一种肝囊肿动物模型的构建方法

本发明属于动物模型构建的，具体涉及一种肝囊肿动物模型的构建方法。

背景技术：

1、肝囊肿是一组病因不同的异质性疾病，其中包括散发的单纯性肝囊肿和遗传性多囊肝病(polycystic liver diseases，pld)两种主要类型。虽然此病患者大多表现为良性病程，但也有部分患者出现与囊肿增大及随后腹部器官受压相关的症状和并发症，如腹痛、早饱、食管返流或囊内出血、感染，甚至囊肿破裂等，极少数患者会因为囊肿体积过大、数量过多造成肝功能受损，甚至肝衰竭。目前此病的主要方法包括保守治疗、抽吸硬化疗法、开窗手术、肝部分切除及肝移植等。其中，肝部分切除术和肝移植是目前疗效确切的两种方法，但肝部分切除术作为一种有创手术，术后并发症较多，而肝移植在临床实践中受到诸多限制。因此，肝囊肿需要其他创新且有效的治疗方式，探索肝囊肿形成的分子机制有助于寻找新的治疗靶点。

2、动物模型是研究疾病的基础之一，动物疾病模型的复制，是用人为的方法，使动物在一定的致病因素(物理、化学、生物)作用下，造成动物组织、器官或全身一定程度的损害，出现某些类似人类疾病的形态结构、功能、代谢方面的变化，通过这种手段来研究人类疾病的发生、发展规律，为研究人类疾病的预防、治疗(包括新药物试用)，开展对疾病的系统化研究有重要的现实意义。随着针对肝囊肿发病机制研究的深入，药物治疗及新药物靶点的开发逐渐成为热点，但临床上肝囊肿的诊疗仍未有重大突破，没有合适的研究肝囊肿的动物模型，也是重要原因之一。

3、目前国内有研究多囊肾的动物模型，但研究多囊肝的动物模型基本没有，至于研究单纯性肝囊肿的动物模型，未见报道。pkd1f/f：cre转基因小鼠和han：sprd大鼠是研究多囊肾疾病的动物模型。其中pkd1f/f：cre小鼠在出生时就发病，且存活时间较短，可用于研究多囊肾病的发病机制研究，但在用于治疗药物的研究方面运用较难。han：sprd大鼠，应用于多囊肾病药物及作用机制的研究。

4、链脲佐菌素(streptozocin，stz)是一种氨基葡萄糖-亚硝基脲，结构式如下：

5、

6、它是一种dna烷基化试剂，能通过glut2葡萄糖转运蛋白(glut2glucosetransport protein)独自进入细胞，对胰腺胰岛的β细胞具有毒性。stz对一定种属动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用，能诱发许多动物产生糖尿病，一般采用大鼠和小鼠制造i型糖尿病动物模型，在犬及猴可致糖尿病，且呈永久性。stz的糖尿病作用具有种属差异性，在豚鼠不引起，在人亦不引起。临床上主要应用于胰岛细胞癌，对类癌肿瘤、霍奇金病、结肠癌及肝癌等有一定疗效。stz可以诱发大鼠和仓鼠肝脏肿瘤，未见可以引起肝囊肿的报道。

7、雌激素(estrogen)是促进雌性动物第二性征发育及性器官成熟的物质，由雌性动物卵巢和胎盘分泌产生。雌激素的受体分布在子宫、阴道、乳房、盆腔以及皮肤、膀胱、尿道、骨骼和大脑，因此，雌激素具有广泛而重要的生理作用，不仅有促进和维持女性生殖器官和第二性征的生理作用，并对内分泌、心血管、代谢系统、骨骼的生长和成熟，皮肤等均有明显的影响。天然雌激素主要是雌二醇、雌酮、雌三醇；临床上常用的雌激素类药物多是以雌二醇为母体人工合成的衍生物，如苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇、炔雌醚、妊马雌酮等。

8、地塞米松磷酸钠是一种肾上腺皮质激素，结构式如下：

9、

10、具有抗炎、抗内毒素、抑制免疫、抗休克及增强应激反应等药理作用，故广泛应用于各科治疗多种疾病，如自身免疫性疾病，过敏，炎症，哮喘及皮肤科、眼科疾病。

11、以上三种化合物均未见可以引起肝囊肿的报道。

技术实现思路

1、基于现有技术中的不足，申请人在研究中发现长爪沙鼠单次腹腔注射链脲佐菌素150mg/kg-200mg/kg，平均20月左右，沙鼠出现明显的腹部膨隆，解剖后发现具有肝部囊肿的现象，因此本发明的目的在于提出一种肝囊肿动物模型的构建方法。

2、为了实现上述的目的，本发明的具体技术方案如下：

3、本发明提供了一种肝囊肿动物模型的构建方法，包括以下步骤：将实验动物腹腔注射链脲佐菌素，然后喂养直到实验动物长出肝囊肿，获得肝囊肿动物模型。

4、长爪沙鼠单次腹腔注射链脲佐菌素，空白组(腹腔注射溶解stz的缓冲液)和模型组(腹腔注射链脲佐菌素150mg/kg)各10只，16.5月后，均出现不同程度的肝囊肿，证明stz的确能够引起长爪沙鼠肝囊肿。

5、优选的，给药链脲佐菌素的方式为腹腔注射。

6、优选的，给药链脲佐菌素的剂量为150mg/kg-200mg/kg。给药链脲佐菌素的次数为1次。

7、以及，构建模型时，可以给药至任何年龄的实验动物，腹腔注射链脲佐菌素后出现明显肝囊肿的时间为16.5月。

8、在构建肝囊肿动物模型时，实验动物可以选择为长爪沙鼠。

9、优选的，实验动物给药链脲佐菌素后，再给药雌激素和肾上腺皮质激素中的至少一种。

10、其中，雌激素可以选择苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇、炔雌醚、妊马雌酮中的任意一种；肾上腺皮质激素可以选择地塞米松磷酸钠，本发明实施例中选择戊酸雌二醇和地塞米松磷酸钠作为示例。

11、进一步地，给药链脲佐菌素后，间隔3个月，再给药雌激素和肾上腺皮质激素中的至少一种。

12、更进一步地，给药雌激素和肾上腺皮质激素两种药物时，两种药物可以联合给药，效果更佳。

13、第一种方案：stz处理后，直接给药(雌激素(戊酸雌二醇)和肾上腺皮质激素(地塞米松磷酸钠))，给药后3个月、4个月、6个月分别取材观察发现不同时间点长爪沙鼠可以出现一定程度的肝囊肿，说明给药(雌激素(戊酸雌二醇)和肾上腺皮质激素(地塞米松磷酸钠)，可以加速肝囊肿发生。

14、第二种方案：长爪沙鼠注射stz后3个月，开始给药(雌激素(戊酸雌二醇)和肾上腺皮质激素(地塞米松磷酸钠)，单独给药，或者联合给药)，给药后24天、42天、3个月分别取材观察，发现随着给药时间增加，肝囊肿程度也增加，(雌激素(戊酸雌二醇)和肾上腺皮质激素(地塞米松磷酸钠)联合用药可以导致肝囊肿出现。

15、在本发明的一些实施方案中，给药雌激素戊酸雌二醇的量为3.33mg/kg，给药频率为每周2次；

16、肾上腺皮质激素地塞米松磷酸钠的量为0.5mg/kg，给药频率为每周2次。

17、其中，给药雌激素(戊酸雌二醇)时采用灌胃给药，给药肾上腺皮质激素(地塞米松磷酸钠)时采用皮下注射给药。

18、本发明的有益效果：

19、本发明通过实验发现向实验动物给药链脲佐菌素，可以获得肝囊肿动物模型，同时发现在给药链脲佐菌素后再单独或者联合给药(雌激素(戊酸雌二醇)和肾上腺皮质激素(地塞米松磷酸钠)可以加速肝囊肿动物模型的获得，为研究肝囊肿提供了动物模型以及对临床上肝囊肿的诊疗奠定了临床基础。